【求助】lipofectamine 2000转染

各位大侠好。本人准备做转染细胞，用的试剂是invitrogen的lipofectamine 2000。因为是初次做，有几个问题想请教一下各位高手。谢谢！
1。质粒DNA抽提完后（用除内毒素试剂盒），是否需要除菌。如果需要，一般用什么方法？
2.如果是做瞬时转染，是不是可以不用线性化质粒，而是提完质粒就可以直接用于转染。如果是稳定转染，就要先酶切质粒，使其线性化，然后再转染。
3.invitrogen的lipofectamine 2000操作说明上说，质粒和脂质体要先用Opti-MEM分别稀释配成溶液后，再混合，然后再加入准备转染的细胞孔中，我就想问此时细胞孔中的培养液是用什么培养液，是不是可以也用Opti-MEM或者无血清无抗性培养基（其它材料上看到）或细胞生长时的培养基含5-10%血清。不知各位都是用什么，可否告知配方（供我参考一下）。

盼复!

1.一般大抽kit都可以除菌 你要不放心 乙醚熏一下
2.不需要线性化 稳转也不需要 ps：瞬转的话 筛稳转 比较麻烦
3.用你养细胞的培养基 无血清

多谢shylook的回答。我想做293T细胞的瞬转，我养它的培养基如果不加血清，293T细胞不会贴壁或贴得不好。但是不是因为转染脂质体加入4-6小时要换成含血清的培养基，所以这4-6小时是影响不大呢？

6h是可以的
加培养基要小心

1, 质粒抽提好之后可以直接转染，没有问题 2，质粒不需要线性化 3，293T是最好转染的细胞，虽然会脱壁，但是成果率仍很高

好的。谢谢两位帮忙！

lipofectamine 2000是否可以用1640稀释，如果没有Opti-MEM的话？

可以

1.去内毒素的盒子提完可以直接转染，至少我用QIAGEN的盒子大提然后用LIPO2000转的话没问题的
2.这个不清楚，能稳定转的话瞬时好吗？
3.转的时候标准是用无血清无抗生素培养基培养2-3小时的，然后换成有血清有抗生素的，转染试剂有一个sinofection不错的