【求助】磷酸钙转染293T
丁香园论坛
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哪位大侠在用磷酸钙转染293T，小妹有问题请教。
版主woxingwosu留言:
有什么具体问题可以提出来，会的人自然就回答了。另外，可以到技术区去问，响应的人可能更更多
有什么具体问题可以提出来，会的人自然就回答了。另外，可以到技术区去问，响应的人可能更更多
曾经做过一段时间，最终放弃，感觉磷酸钙转染还是比较烦心。
最大的问题是磷酸钙转染的试剂不能长期保存，使用了几个月之后就要更换，重新配制，而且要求试剂的精度很高，实验室要有很灵敏准确的ph计。
最大的问题是磷酸钙转染的试剂不能长期保存，使用了几个月之后就要更换，重新配制，而且要求试剂的精度很高，实验室要有很灵敏准确的ph计。
要转染好多瓶提取病毒，总是做不好，实验没有进展，很是郁闷呀，所以想请教高手帮忙分析一下呀.
你转染效率多少？有50%左右吗？我做的效率大概也就在这个量，不过磷酸钙转染感觉表达量还是很不错的，比脂质体要高很多。如果觉得这个效率可以用了，我可以给你一个protocol
我没有看过转染效率，听老师说不是很高。我想问一下你一般是转染前多久传代呀，我看网上一般说是24小时前传代，可是我一般都是转染前两天传代，我不知道已经生长了两天的细胞会不会不适合做转染？
xinlongrui wrote:
我没有看过转染效率，听老师说不是很高。我想问一下你一般是转染前多久传代呀，我看网上一般说是24小时前传代，可是我一般都是转染前两天传代，我不知道已经生长了两天的细胞会不会不适合做转染？
根据我的经验，应该在24小时内转染效果是比较好的，要不然细胞会老掉，效率有所降低，特别是磷酸钙转染。再说了，为什么你会等到48小时在转呢？293T应该是长的很快的，估计48小时后细胞密度也太高了吧？
我也觉得应该是24小时内转，但是我的细胞一天贴壁不好，转染前换液时会掉很多。
最近细胞又有了支原体污染，实验做不动，很急。
最近细胞又有了支原体污染，实验做不动，很急。
那你的细胞状态实在是太差了，一填还贴壁不好。转染效率肯定也是受到影响，还是赶紧换新的细胞吧，祝好运~~
状态良好的293T在8h既可以帖的很好，我经常在种细胞12h之后就开始转染，效果还很不错
xinlongrui wrote:
我也觉得应该是24小时内转，但是我的细胞一天贴壁不好，转染前换液时会掉很多。
最近细胞又有了支原体污染，实验做不动，很急。
病毒包装细胞状态很关键，贴壁不好应该也有这个因素在里头。先把细胞养好吧～
kikie wrote:
病毒包装细胞状态很关键，贴壁不好应该也有这个因素在里头。先把细胞养好吧～
同意楼上，看来是高手啊，加qq聊吧。2 3 2 8 8 8 5 09
xinlongrui wrote:
哪位大侠在用磷酸钙转染293T，小妹有问题请教。
转染病毒的话，第一步是用CaCl2 转染293T，收毒2皿就够了，看来你的细胞绝对有问题
293细胞和293T细胞的贴壁性本来就不是很牢 细胞性质决定的
不过正常情况下 细胞长得还是比较快的 24小时内转染是最好的 不过偶用的是脂质体
不过正常情况下 细胞长得还是比较快的 24小时内转染是最好的 不过偶用的是脂质体
想问下下，磷酸钙转染试剂中的HBSS保存在哪里啊，我用自己配的磷酸钙转染试剂，重复性非常差，第一次转染效率有
９０％多，后面要么转染无荧光，要么只有５０％荧光，郁闷啊！都不知道原因在哪里
９０％多，后面要么转染无荧光，要么只有５０％荧光，郁闷啊！都不知道原因在哪里
zoezoezoe wrote:
想问下下，磷酸钙转染试剂中的HBSS保存在哪里啊，我用自己配的磷酸钙转染试剂，重复性非常差，第一次转染效率有
９０％多，后面要么转染无荧光，要么只有５０％荧光，郁闷啊！都不知道原因在哪里
4度密闭保存，切忌-20保存！！
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