【求助】NF-KB p65活性测定

请教各位高手，我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：
1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？
2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF-KB p65活性与测总的NF-KB p65活性意义是一样的，我想知道是不是这样？
3、对于NF-KB p65活性测定，用p-p65抗体时，组织蛋白提取能不能用全蛋白提取试剂盒？还是必须用包浆蛋白或者核蛋白提取试剂盒？
4、对于NF-KB p65活性测定时，内参应该选用actin还是GAPDH？如果用GAPDH做内参影响大吗？
期盼您的答复，谢谢！！

NF-KB p65活化入核 会发生磷酸化，所以用磷酸化抗体检测NF-KB是否活化，对于蛋白的提取用胞浆/核蛋白提取试剂盒，选取actin做内参就可以

NF-KB p65活化入核 会发生磷酸化，所以用磷酸化抗体检测NF-KB是否活化，对于蛋白的提取用胞浆/核蛋白提取试剂盒，选取actin做内参就可以

提核蛋白，

我做的NF-KB ，总蛋白，胞浆，胞核的表达 一样，胞核相对要少一些，不知道为什么，好像没什么差别。他们说是应该用磷酸化的，请高人赐教

能够直接对血液细胞标本进行NF-kB p56试剂盒的检测，谢谢