【求助】NF-KB
丁香园论坛
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各位大侠好，小弟愚问一下，我想测定NF-KB活化后细胞核内的量，这需要提取核蛋白，但是蛋白量太少，提取出来能否测出NF-KB啊！thank you !
1. 通过提取细胞核、细胞浆内的蛋白来行western blot检测NF-kappa B 的表达情况是可以的，因为很多时候是通过NF-kappa B转位来实现活化的，所以提取的时候我不知道楼主是自己配制试剂提取还是用试剂盒提取的，我建议可以将2-3皿细胞（当然是相同的分组）一起提取，并采用试剂盒来提取，这样纯度和浓度可能理想一点；
2. 我做过的经验是，其实还可以结合免疫荧光来分析其核转位或表达的情况，但是建议不在普通荧光显微镜下观察，有条件的话可以用激光共聚焦来看，这样好一点。
3. 如果条件很好，或者想做的更深一点，可以通过EMSA或者CHIP直接观察NF-kappa B的DNA结合活性，这样是最直接反应NF-kappa B活性的方法。
个人建议，大家共同讨论。
2. 我做过的经验是，其实还可以结合免疫荧光来分析其核转位或表达的情况，但是建议不在普通荧光显微镜下观察，有条件的话可以用激光共聚焦来看，这样好一点。
3. 如果条件很好，或者想做的更深一点，可以通过EMSA或者CHIP直接观察NF-kappa B的DNA结合活性，这样是最直接反应NF-kappa B活性的方法。
个人建议，大家共同讨论。
哦了，感谢啊！
可以使用上海生工的以下产品来提取核和胞质蛋白
我用的是碧云天的核蛋白提取试剂盒，6孔板的细胞，长到80%，每个孔所提的核蛋白基本都有条带的
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