【求助】Ras-Raf-MEK-ERK信号通路试验求助？1-2分转移求助

各位老师在下打算设计一个试验大致思路是这样的：药物作用于肺癌细胞Ras-Raf-MEK-ERK信号通路调控A基因表达。在下第一次学习搞通路，参考了了一些文献，但是还有不明白。请大家帮忙分析一下 请给些中肯的建议，我这个试验设计有何不妥？步骤？还有要检测几个激酶比较好？检测哪几个？通路应该设对照组对吧？也就是检测未用药物干预的和干预后细胞通路中的激酶表达做对比？ 呵呵 在下在这方面很弱，请大家指教。为表示感谢 如果分析详细在下愿意转移积分1-2分表示感谢！学习嘛得下血本 呵呵呵

自己顶

首先要明确药物作用于肺癌细胞后A基因的表达是上调还是下调，在蛋白水平幻视mRNA水平？是否dose-dependent,确定medicine 的作用浓度。

其次，IB 检测medicine 作用后 ERK的活化情况，有无变化，total ERK 水平,
当然要有阴性对照，

如pERK无变化，再check p-p38 或p-JNK.

进一步的检测ERK下游的基因活化情况， 与A基因有无关系。

欢迎进入基础研究系列，准备烧钱啊

首先非常感谢“苍茫云海间”战友的热心帮助，建议很中肯，请版主转移一分给“苍茫云海间”战友，谢谢。
在下还有几个问题：
1.通路检测指标，我们只用检测ERK吗？还是RAS、RAF、MEK、ERK都检测？
2.关于通路对照组的设置，我是否可以用非药物干扰组做对照，检测其通路中激酶的表达？

谢谢

也在做ERK通路 同问

请问楼主现在做该实验了吗？结果如何？能不能详细说明一下怎么进行的，我也想做这条通路。还在研究中，不知道如何入手呢。

虽然还没做到，但有同样疑惑

看到楼上有这么多同学还在做这个信号通路，有些感慨：
1，信号通路这个东西真的是很多年以前的事情了（至少我6年前就做的很热了），不是说不能做，只是单纯做这个很难发好文章了
2，如果要检测通路的激活，最好要把整个通路的分子都拉一遍吧，这个需要花点钱，因为单个靶分子也说明不了问题
3，证明A基因和通路的关系，肯定会用到该通路的抑制剂或者DN plasmid，这个也需要花点钱
4，对照组一般选择用药物的溶剂
5，信号通路真的是花钱的一个实验，而且MAPK也是一个基本和什么都能扯上关系的信号通路

信号通路方面的实验我做过，可以交流一下，手机：15921609870 QQ：57325595

请问下哦，Ras-Raf-MEK-ERK通路的检测 我准备做-Raf、MEK1、ERK1的检测，用RT-PCR检测灰度值可以吗？看见有人说用WT做好些。是这样吗？谢谢

我也在做Ras-Raf-MEK-ERK，不知道需要检测哪些蛋白，怎么做？我是新手

我觉得做通路首先要把通路里面的关键分子背景以及调控关系先研究请求，然后根据已有的经验再进行实验设计，可以少走很多弯路。这方面可以先用IPA软件看一下，到里面查一下Canonical Pathway，即经典通路，并查看所有通路里面分子的详细信息以及通路里面每条关系的信息与文章。

IPA软件是什么软件啊？可以共享一下么？