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【求助】关于Ras-MAPK信号通路的问题

丁香园论坛

2287
我想用western blot的方法,研究临床的手术切除的脑组织病理标本中Ras-MAPK信号通路的表达变化的情况。请问具体要研究哪些指标呢?在标本处理的时候需要注意哪些方面?谢谢~~
期待中~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
首先,你要保证样本蛋白不被降解;第二,要正确匀浆组织样本与蛋白定量,这样才胡保证一样的量是一致的;第三,你要选择磷酸化的抗体来研究该通路,同时还要观察总蛋白是否变化,用总蛋白来观察磷酸化水平的变化,当然同时你必须要做内参GAPDH or beta-actin来检验上样量是否一致。最好多做几个蛋白的抗体,从上游激酶到下游的底物,最好买CST的抗体。
你好,楼上说的总蛋白是否指磷酸化和非磷酸化的MAPK的总和?

本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

师兄微信号:shixiongcoming

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