【求助】关于gsk3-beta功能的疑问

我最近在体外细胞做的关于gsk3-beta功能问题，发现药物处理以后，gsk-3-beta的总表达量下调，如果是这样的话
1、我是否能够得出gsk-3-beta的活性下调的结论？
2、是否还有必要做非活性形式的表达量？我的理解是，基础状态下，gsk-3beta维持的是低活性状态，如果总量都下调了，那应该能够得出活性降低的结论了吧？
3、另外，在这种情况下我是否有必要去做gsk-3-beta的216位点的活性形式的表达量变化，似乎文献上看到的结果都是喜欢做第九位的，而216位活性形式表达量一般不怎么喜欢讨论，这又是为何？
盼高手能够指点一二，非常感谢！

我的理解是：基础状态下，gsk3-beta是低活性，那也就是216位磷酸化？或者是否可以这样理解，gsk3-beta有几种形式，活性形式（216）非活性形式（9），还有没有磷酸化形式的？不知道这样想对不对？

针对你的问题试着回答一下。
（1）总量下调不能说明活性降低，因为决定GSK3-beta的活性的还与其磷酸化的比例和磷酸化的位点有关。所以你除了要做GSK3-beta总的蛋白表达之外，还要做磷酸化的GSK3-beta的蛋白表达。

（2）应该活性形式和非活性形式都做。一般来讲，GSK3-beta在Ser9位点磷酸化之后活性收到抑制，而在216位点磷酸化之后，其活性收到加强。因此建议将GSK3-beta的两个磷酸化位点都做了，另外还要同时检测GSK3-beta的总蛋白表达，这样才能全面的说明问题。

（3）同上。两个磷酸化位点都要做，但是可能在不同的病理条件下，侧重点有所不同，这主要体现在你的论文的讨论中。因此建议实验前多做论文研究，查阅一下别人的发表文章，看看与你的病理模型更相关的是哪个位点。

非常感谢你 的回复，现在我遇到的问题是我做出来蛋白总量还有216位点是有变化的，9位因为买的是santa curz的抗体，现在死活做不出来，很头痛，我要说明的问题是他的活性降低，我也看到216位点磷酸化水平降低了，可是现在没有第九位的结果（就是没有办法得到第九位升高），不知道我的这个结果是否可以说明gsk活性降低了？还是一定需要第九位的结果才能解释这个问题？似乎也有些人说216特异性不强，没有第九位有说服力，不是很能理解这其中的原因，再次感谢你！

非常感谢你 的回复，现在我遇到的问题是我做出来蛋白总量还有216位点是有变化的，9位因为买的是santa curz的抗体，现在死活做不出来，很头痛，我要说明的问题是他的活性降低，我也看到216位点磷酸化水平降低了，可是现在没有第九位的结果（就是没有办法得到第九位升高），不知道我的这个结果是否可以说明gsk活性降低了？还是一定需要第九位的结果才能解释这个问题？似乎也有些人说216特异性不强，没有第九位有说服力，不是很能理解这其中的原因，再次感谢你！

As for the GSK phosphorylation, it is clear now that, GSK serine phosphorylation (S9 for beta and S21 for alpha) is accompanied with or inactivates the GSK
activity. However, it is still not conclusive what the role of Tyr phosphorylation (Y216 fro beta, Y279 for alpha) on GSK activity is. One reference is a review paper published in Cell in 2001, you may take a quick a look from the following
website just by clicking "Tyrosine Phosphorylation and Dimerization"

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WSN-43F85YV-2&_user=1111158&_coverDate=06%2F29%2F2001&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_cdi=7051&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1039919065&_rerunOrigin=google&_acct=C000051676&_version=1&_urlVersion=0&_userid=1111158&md5=0bd62dafef15f445f5e3e8147cde6f81#secx5

Another reference is a book at the website below. Of course, we may find much more references regarding this issue.
http://books.google.com/books?id=3mgPzNFjcWAC&pg=PA51&lpg=PA51&dq=gsk+tyrosine+phosphorylation+and+activity&source=bl&ots=x5ueTldpez&sig=CqRFJleXtEBn9OfelhODPAc28xs&hl=en&ei=KerNSu-XGcem8Abm-qmABA&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=1#v=onepage&q=gsk%20tyrosine%20phosphorylation%20and%20activity&f=false

By the way, based on my own experience, most of antibodies from Santa Cruz are NOT reliable at all. I strongly recommend Cell Signaling Technology (CST) which is probably the best choice, in particular for phospho-specific Abs.

Good luck!

非常感谢楼上的答复，现在明白了。哎，这个抗体现在就不知道怎么能做出结果了。。。。。再试多几次吧。。。

非常感谢，因为进实验室没有多久，还是感觉到现在看的文献太少，对这些问题理解太浅，在看文献的过程中，我还是没有办法理解一个问题，那就是gsk-3beta的活性问题，
例如说，
文献中说gsk在基础状态下士处于一种低活性状态，这个低活性状态的意思指的是第九位的含量高还是指216位的含量低？
另外，gsk3-beta在糖代谢途径中发挥作用的话是否需要216位的磷酸化才能磷酸化糖原合酶？或者说是不是没有216位也能磷酸化糖原合酶？只是有了216位后磷酸化作用更强？
问题可能有点浅显~~~

我最近也因为GSK-3 beta 总蛋白与磷酸化蛋白活性之间的关系理不出头绪。GSK-3 beta 总蛋白减少，p-GSK-3 beta (ser 9)增加，是不是足以说明有活性的GSK-3 beta 减少更多，这样理解不知道对不对，希望给以指点。

楼主你好，请问你做出结果的tyr216的抗体是哪个公司的。。。我做出来总量是减少的，active B catenin是减少的，那我有必要做ser9 和tyr216的磷酸化形式吗？我想研究wnt和akt。。。

最近在做PI3K通路，查了不少文献，有的说糖尿病模型gsk增加，p-gsk减少，有的说gsk不变，p-gsk增加，本人做了好久，p-gsk3α/β条带一直很淡，很是纠结，想咨询下朋友们，我应该研究α还是β，谢谢了