【求助】关于磷酸化位点的几个问题

请问各位高手，1）除了质谱分析还有什么办法可以确定某个蛋白的磷酸化位点；
2）还有如果知道了这个磷酸化位点怎样可以抑制其磷酸化(研究其下游信号通路）？
3）我研究的某个受体具有酪氨酸激酶区域，也知道了几个磷酸化位点，但是研究发现其酪氨酸激酶活性并不高，这是什么意思？是说其磷酸化位点不易被磷酸化，还是可以磷酸化，但激活了另外的信号通路？
非常感谢！

回答问题2，可以将这个位点突变成其他氨基酸，使之不能被磷酸化

如果是一个常见蛋白，可买到检测磷酸化位点的特异性抗体，简便快速，只要化点钱。

1,质谱分析即方便又精确,为什么要选用其他方法呢?
2,因为磷酸化应该只发生在丝苏酪氨酸上,把这几个氨基酸突变成丙氨酸再看其能否观察到你磷酸化蛋白才有的特征就知道是谁磷酸化切发挥功能的了
3,酪氨酸激酶活和其能被磷酸化之间好像没有什么必然联系啊,即使不作为激酶,但可以作为效应传递的转导子啊,同样发挥作用