【求助】请教几个血液miRNA的问题

干了若干年临床刚开始做实验，一些弄不明白的问题，请坛内高人指点一些：
①做血液来源miRNA，qRT-PCR的内参到底用哪个比较好？文章里有U6、miR-16等，但有的文章互相有点矛盾。
②我的血清样品很少，每个都不到1ml。选择stem-loop逆转录好，还是poly(A)好？问了几个朋友，有的说stem-loop省RNA样品，有的说poly(A)省RNA，到底哪一个更节省一些？我如果poly(A)的方法逆转录，准备检测四个miRNA，是否逆转录后要把cDNA分成四份，各做一次qPCR？
③大家的经验，要检测四个miRNA指标，需要从多少血清中提取总RNA？

你可以开始2个内参都选定，然后对于你特定的细胞系或者组织看看其稳定性到底选用哪一个。血清中miRNA的表达相对较低，但是对于TaqMan探针而言一个样品只需要5ng的总RNA量。，检测几个的表达已经足够了。

谢谢版主！