【求助】RAW264.7诱导破骨细胞
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求助,本人用RAW264.7细胞诱导破骨细胞一直失败，96孔板，2000个细胞/孔，RANKL50ng/ml,M-CSF25ng/ml,5到6天后TRAP染色一直没有看到理想的结果，各位前辈有做过这个实验的请传授经验，培养ＲＡＷ２６４．７细胞的时候是否有些特别注意事项，如何使RAW264.7的状态达到最佳？以及关于TRAP染色有什么需要注意的，多谢
同问，最近一个同事也要做RAW的诱导
同问，顶起来！
我用24孔板做过,培养基用DMEM，RANKL 浓度10-50nM,处理4天，中间换液一次，trap染色后镜检分化率还可以的。我觉得细胞状态比较重要。Raw细胞应该是小而圆的形状，显微镜下观察很亮的那种。可惜保存的状态好的细胞都用掉了，后来细胞估计是分化了，形状改变，不够圆而亮，而且变大了，甚至有的伸出伪足，这样就很不好了，如果用这种细胞诱导破骨细胞的话，估计很难看出诱导和对照的差异。
gypsy wrote:
我用24孔板做过,培养基用DMEM，RANKL 浓度10-50nM,处理4天，中间换液一次，trap染色后镜检分化率还可以的。我觉得细胞状态比较重要。Raw细胞应该是小而圆的形状，显微镜下观察很亮的那种。可惜保存的状态好的细胞都用掉了，后来细胞估计是分化了，形状改变，不够圆而亮，而且变大了，甚至有的伸出伪足，这样就很不好了，如果用这种细胞诱导破骨细胞的话，估计很难看出诱导和对照的差异。
请问楼上现在还有比较好的RAw么？
同问，有没有对RAW264.7细胞比较了解的高手，感觉这个细胞不容易消化；而且传代对细胞形态影响很大；按照ATCC上推荐的冻存方法冻存的细胞，复苏是活的细胞非常少，难以复苏。
我也遇到问题了啊
问 rankl 与m-csf 价格贵不贵
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