RAW264.7诱导破骨细胞
如你所见228
使用RAW264.7（普诺赛）第七代，undefined104个/cm2接种于24孔板，12h后更换为含50ng/ml RANKL（pepro tech分装后于-20℃保存）的10%FBS高糖培养基培养液，1-2天换次液，第6天行TRAP染色（35min）＋甲基绿染色（5min）。未染色之前没有看到典型的破骨细胞，染色之后有好多小细胞都是红色的，（图1、2）请教各位老师，这是怎么回事呢？细胞个数太多了吗？之前用96孔板接种2000个/孔也是类似的结果（图3、4）。
3 个回答
loveliufudan
首先，对于未染色之前没有观察到典型的破骨细胞，可能是因为破骨细胞需要更长的时间来分化和形成。您在第6天进行TRAP染色，但有时需要更长的时间才能观察到明显的破骨细胞形成。您可以尝试延长培养时间，观察是否会出现破骨细胞的特征。
关于染色后出现很多小细胞呈红色的情况，这可能有几种可能的解释。首先，这些小红色细胞可能是RAW264.7细胞的前体或早期破骨细胞，它们正在分化并准备形成成熟的破骨细胞。这可以解释为什么在未染色之前您没有看到典型的破骨细胞，因为它们可能还处于早期分化阶段。
另一个可能的解释是，培养条件中的RANKL浓度可能过高，导致破骨细胞分化速度加快。这可能会导致较多的小细胞形成，但同时可能会减少破骨细胞的成熟程度。您可以尝试减少RANKL的浓度，观察是否会对破骨细胞的形成和成熟产生影响。
最后，您提到在之前的96孔板实验中也观察到了类似的结果。这可能说明您使用的培养条件或实验步骤中存在一些问题。建议您仔细检查实验步骤、培养基配方、细胞密度等因素，以确保实验条件的准确性和一致性。
如你所见228
谢谢您的回答，解决了我的疑惑，我接下来会按照您的建议改善实验，谢谢老师，祝您生活愉快
huarenqiang5
是的，细胞浓度太高了，建议降低细胞浓度试试看。
如你所见228
谢谢您的回答，我再试一下低浓度，祝您生活愉快
土井挞克树
你的细胞密度太大了，很容易培养失败，建议降低细胞密度再做
如你所见228
谢谢您的回答，这个浓度是参考了几个文献中最低的那个，应该还是高了，我再试试低一些的浓度梯度，祝您生活愉快。
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