【求助】U6启动子种属特异性问题??
丁香园论坛
mengxiaoyong wrote:
小弟要在绵羊上做RNAi,不知人源,鼠源U6或H1启动子在绵羊体内是否有功能?哪位大侠知道呀?先谢了!实验室里有U6或H1启动子载体!
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子,如人源H1或鼠源U6启动子,pol III在哺乳动物细胞(绵羊是哺乳动物)内引导非编码小RNA的转录,转录产物无poly(A)尾,且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA); shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA,进而启动RNAi,介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。
是可行的!
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