血液检验室内质控存在的若干问题及对策

互联网2014-12-26

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室内质量控制(IQC)是实验室人员采用一系列方法，连续评价本实验室工作的可靠程度。确定报告能否发出，是保证实验室工作质量的重要措施。目前采供血机构检测抗HCV、抗HIV、HBsAg均采用ELISA法，ELISA有其自身的特点，如灵敏度较高，同时影响因素也较多，这就更需加强质量控制。本文就实验室内过程中出现一些问题及其对策报告如下。 　　1　质控物

室内质控的开展要求有高质量的质控物，质控物的好坏直接影响监测，一般基层单位均选用卫生部临检中心或省检验中心提供的免疫质控血清，其具有良好的质量保证，但是在贮存运输和使用过程中受许多因素的影响。质控物的购买应避开7月、8月、9月高温季节，以免邮寄过程中造成含量下降。质控物要求-20 ℃保存，而质控物含量较低，4 ℃存放也会使含量下降。一般HBsAg使用3 d，抗HCV使用1周即需更换。避免反复冻融，因反复冻融能使蛋白质变性抗，原成分及空间构象发生改变。

2　试剂

从1994年10月起卫生部对诊断试剂实行统一管理批批检定。目前使用的国内试剂厂家很多。能通过批批检定只是起码要求，其灵敏度和特异性都有差异。加之运输储存多种因素影响，到用户使用时质量已经发生了不同程度的变化，尽管省放免中心对10多家试剂进行了初筛，但目前仍无权威部门发布的试剂评价结果，总之初检试剂应选片段全，灵敏度高的，复检选项特异性好的试剂。

3　加样与稀释

3.1　减少误差

由于免疫试剂加样为10 μl，多加或少加1 μl就可造成10%的误差，因此移液器的准确性需经常校验，最好使用进口移液器，同时移液器和移液头间连接应紧密，建议取样时移液头应刚进液面，以免粘带血清。稀释液勿用滴瓶滴加，以免造成稀释倍数的变化，对灰带区造成误判，使用移液器加样较稳定。

3.2　稀释方式

在板中加入100 μl稀释液再加10 μl标本，待样品全部加完后混匀；预先进行1∶11倍稀释然后加到每孔中；在板中加入100 μl降稀释液再加10 μl标本，同时3次混匀。根据报道第1种方式易致非特异性IgC吸附到包被抗原或固相载体上，第2种方式在大量标本检测时亦不适用，以第3种方式为好。

4　温育

37 ℃温育常采用三种方式即恒温培养箱，水浴箱和电热块。根据报道以恒温箱为主。由于培养箱中板的周围都是37 ℃，而水浴箱的温度指标是水的温度，虽然酶标板漂浮在37 ℃水浴中板底37 ℃，但空气温度在开盖时会下降(尤其在冬季)，温度上升比培养箱慢，达到37 ℃所需时间长，导致吸光度下降。

5　洗板

一般适用8或12孔头，应随时注意孔头是否堵塞，同时要求洗板后残液<2 μl，即人工扣板垫纸不湿，浸泡时间>45 s。洗液预先用合格的蒸馏水配制并充分溶解，保持pH正常，定期清洗容器防止长菌长霉，这些都是防止花板，本底增设的重要措施。

6　显色

严格按照说明书控制显色时间、温度以免人为造成吸光底升降，而影响结果，加终止液后及时比色。TMB被认为是ELISA反应中最佳色原底物，但终止15 min后高浓度都易产生灰褐色絮状沉淀并伴黄色渐退吸光下降，建议终止15 min内及时比色。

7　酶标仪性能评价与鉴定

卫生部明确规定酶标试剂不得用目测法判定结果，食品和设备是搞好质控和日常工作的前提和保证。所以酶标仪必须质量过关，性能稳定，有报道介绍以490 nm甲基橙溶液为例的酶标仪评价方法，内容包括滤光片波长、零点飘移、线性、精密度、通道差与孔间差等，具有较高的实用价值。经常维护其光学部分防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。

8　质控图的制作

ELISA室内质控方法一般沿用生化LJK图进行，利用westgard规则判定失控，应首先做好OCV和RCVK以确定失控标准，在实际工作中取得好效果。“即刻法”质控只需连测3次即可对3次进行质控，给基层单位带来了方便。但其SDI设置是套用生化手段，在免疫检测是否适用尚无定论，同时LJ图不能判ELISA的特异性，鉴于ELISA试验目的在于检出抗原或抗体，因此要确保敏感性和特异性，故有人提出临界值血清界定法。试剂所设阴阳对照为内对照，另设临界值，高值阳性和2份正常人阴性对照，作为外对照与标本同时检测，临界值S/CO>1，高值阳性S/CO>10，正常人阴性对照的A值在0.050～0.100,只要一项不符合即判为失控，高值为“HOOK”监控，因此临界值血清界既反映ELISA的灵敏度又兼顾特异性，实际工作中和质控图一起应用。

9　结论

室内质控的目的在于能控制实验室每天的检测结果是否可靠，能否报告结果，是实验室管理的最基本措施。临界值血清做室内质控血清可防止弱阳性发生标本漏检，每次实验时随需血所致医疗纠纷的一个关键证据。实验过程中失控现象时有发生且以超下限为多见，致临界值结果阴性，此点引起特别重视，必须将失控板重做并找出原因，以确保报告准确性。由于开展了室内质控，工作人员责任心加强了，操作更规范，提高了实验检测的准确性，有效保证了血液质量。

参考文献：

［1］高东英.采供血机构体外免疫诊断试剂评价系统的初步探讨［J］.中国输血杂志，1999，12(1)：56. 　　［2］张利，李博，李文.雨种温育方式对ELISA检测抗HCV结果影响［J］.中国输血杂志，1994，7：196. 　　［3］郑怀竟.免疫学检验室内质控与室间质评［M］.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版，1997：4953.

来源：检验医学网