【求助】信号传导中钙离子测定

:D 有两个问题请各位大虾帮忙一下啊:
1, 我做的是药理实验想了解Pkc与细胞内钙离子浓度的关系，我知道现在很多人用的是钙敏感性显微荧光测定，就是加个fura什么的，这个具体步骤怎么做的呢，是不是要用到共聚焦啊？
2，请问有人做过细胞膜钙离子通道表达的吗 ，比如western ，这个难做出吗？

好像还有一种染料，主要利用与钙结合后，激发波长不一致引起的，好像需要特殊激发显微镜吧，我想测定整体动物的钙离子变化不知道有什么好的方法吗？

我是用fluro-3来做。就是跟MTT的实验方面差不多，然后用连续光谱酶标仪检测变化。

细胞培液中加入Fluro-3/AM或Fluro-4/AM孵育半小时后更换含药物的培液，共聚焦显微镜下实时监测，细胞荧光信号强度反应细胞内钙离子水平的动态变化。共聚焦显微镜可设置图片采集时间间隔和采集时间长度，最后可用图片的形式来反映或做成细胞荧光强度的时间曲线图。
Fluro-3/AM或Fluro4/AM本身不发荧光，进入细胞内可与细胞内的游离钙离子可逆性结合与分离，变成能够发出荧光的Fluro-3或Fluro-4，故能反应细胞内钙离子水平的动态变化。

cellvizio 探针式体内（在体）荧光显微镜可以测定整体动物的钙离子变化。
探头最细可达0.3mm的荧光光纤探针,通过脑定位仪插入到需要研究的部位观测荧光，可以检测大多数的常见荧光蛋白/染料.并有时实时录像功能。

通过离子浓度相关荧光染料研观测脑内特定部位离子浓度变化，如钙离子等；

同样的道理也可以插入动物的任何部位去观查整体动物的钙离子变化。参考文献：Live imaging of neural structure and function by fibred fluorescence microscopy

我想问梧桐树001，你所说的更换含药物的培液使用什么配置的？含有钙离子吗？