简介
骨组织中含有大量的钙，常规石蜡、冷冻包埋均无法正常得到切片，因此组织学上得到切片并展示骨组织异常的前提是良好的脱钙。常规脱钙有快、慢两种方法，快速脱钙适用于 HE 染色，形态保持良好，用时短，但抗原破坏严重，不用于组织化学分析；慢速脱钙对时间和温度的要求较高，需时长，但抗原保持良好，适用于免疫组化、荧光等后续检测。
材料与仪器
试剂：
① 硝酸脱钙液
（硝酸 10 ml、冰醋酸 20 ml、甲酸 50 ml、水 70 ml、甲醛 10 ml）
② 10％ EDTA 脱钙液
（取 10 g EDTA 溶于 10％ 中性甲醛，配成 100 ml 即可。）
步骤
骨组织脱钙（快速、慢速）实验的基本过程可分为如下几步：
（一）快速脱钙
A. 取过度麻醉死亡小鼠的需要部位骨骼，放入固定液中固定约 24 小时。
B. 取出骨骼，放入硝酸脱钙液中，液面高于标本 3 ml 左右。
C. 脱钙终点判断：以大头针试探可轻松刺入为准（一般成年小鼠骨骼 7 小时左右即可）。
D. 脱钙后无需中和，将标本放在流水下冲洗 5 分钟左右即可进行脱水。
（二）慢速脱钙
A. 取过度麻醉致死的小鼠相应部位的骨骼，放入固定液中约 24 小时。
B. 取出骨骼放入 10％ EDTA 脱钙液中并置于 4 ℃ 环境下进行脱钙，每 4～5 天换一次脱钙液。
C. 每天观察骨骼，以大头针试探可轻松刺入为脱钙终点。
D. 除去骨头，蒸馏水冲洗后可进行脱水。
结果示例如图 8-10-4 所示。
来源：丁香实验
