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骨组织脱钙(快速、慢速)实验

相关实验:组织学分析实验

最新修订时间:

简介

骨组织中含有大量的钙,常规石蜡、冷冻包埋均无法正常得到切片,因此组织学上得到切片并展示骨组织异常的前提是良好的脱钙。常规脱钙有快、慢两种方法,快速脱钙适用于 HE 染色,形态保持良好,用时短,但抗原破坏严重,不用于组织化学分析;慢速脱钙对时间和温度的要求较高,需时长,但抗原保持良好,适用于免疫组化、荧光等后续检测。

材料与仪器

试剂:

① 硝酸脱钙液

(硝酸 10 ml、冰醋酸 20 ml、甲酸 50 ml、水 70 ml、甲醛 10 ml)


② 10% EDTA 脱钙液


(取 10 g EDTA 溶于 10% 中性甲醛,配成 100 ml 即可。)

步骤

骨组织脱钙(快速、慢速)实验的基本过程可分为如下几步:

(一)快速脱钙


A. 取过度麻醉死亡小鼠的需要部位骨骼,放入固定液中固定约 24 小时。

B. 取出骨骼,放入硝酸脱钙液中,液面高于标本 3 ml 左右。

C. 脱钙终点判断:以大头针试探可轻松刺入为准(一般成年小鼠骨骼 7 小时左右即可)。

D. 脱钙后无需中和,将标本放在流水下冲洗 5 分钟左右即可进行脱水。

(二)慢速脱钙


A. 取过度麻醉致死的小鼠相应部位的骨骼,放入固定液中约 24 小时。

B. 取出骨骼放入 10% EDTA 脱钙液中并置于 4 ℃ 环境下进行脱钙,每 4~5 天换一次脱钙液。

C. 每天观察骨骼,以大头针试探可轻松刺入为脱钙终点。

D. 除去骨头,蒸馏水冲洗后可进行脱水。

结果示例如图 8-10-4 所示。

来源:丁香实验

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