小鼠骨骼标本制作及双色染色

小鼠骨骼标本制作及双色染色是先将小鼠骨骼以外的身体成分消化掉，再通过硬骨和软骨的不同特征将其分别用对比鲜明的色彩进行整体染色，可用于直观地表现整体骨骼的发育缺陷。

器材：染缸、小鼠等

试剂：

① 氢氧化钾退色液：2% 氢氧化钾、2% 甘油、2% 甲醛等量混合

② 茜素红染液：1 g 茜素红溶于 1000 ml 60% 乙醇

③ 软骨染色液：95% 乙醇 80 ml，冰乙酸 20 ml，阿利新蓝-8 GX 10 ml

④ 硬骨染色液：0.5% 氢氧化钾溶液中加入少量茜素红

⑤ 胰蛋白酶混合液：饱和硼砂水溶液 30 ml，水 70 ml，胰蛋白酶 1 mg

⑥ 甲醛

⑦ 0.5% 过氧化氢溶液

⑧ 纯甘油

⑨ 3% 重铬酸钾溶液

小鼠骨骼标本制作及双色染色的基本过程可分为如下几步：

1、将过度麻醉死亡的小鼠全身小心去皮及除去腹腔、胸腔内的多余脏器，避免损坏骨骼。

2、把去皮后的标本整理好姿势，浸入 3% 重铬酸钾溶液中几天，除去材料表面的脏物和脂肪粒块。当溶液变浑浊时即更换新液，直到溶液不浑浊为止。取出用清水洗干净，再浸入 95% 乙醇中继续脱脂 1 周左右。

3、将标本转入 20% 氢氧化钾溶液中静置，1 周左右可见肌肉呈半透明状态，里面骨骼隐约可见，即终止透明。

4、把透明后的标本浸入软骨染色液 1～2 天，至尾部骨骼末端均匀呈藏青色，依次进入 95% 乙醇（2 次）、80% 乙醇、70% 乙醇、50% 乙醇、30% 乙醇，每次 2～3 小时。清水漂洗过夜。

5、使用胰蛋白酶混合液处理标本，30℃ 烘箱静置 1～3 天，以中间椎骨显透明停止。

6、在硬骨染色液中染色 1～2 天，至脊椎骨染成红色。

7、0.5% 的氢氧化钾浸泡 1 天，并依次通过 0.5% 氢氧化钾: 甘油为 3:1，1:1，1:3 的梯度甘油，每次 1 天，最后转入纯甘油可调整姿势长期保存。