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TRAP 染色实验

相关实验:组织学分析实验

最新修订时间:

简介

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶,对骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色可以了解破骨细胞的骨吸收情况。

原理

TRAP 染色实验的基本原理是应用偶氮耦联免疫组化分析法,抗酒石酸酸性磷酸酶酶活性部位显示红色反应。使用试剂盒,以萘酚二磷酸盐为底物,偶氮副品红为显色剂,TRAP 在酒石酸钾钠存在条件下可将萘酚 AS-BI 磷酸盐水解为萘酚 AS-BI,与显色剂结合形成红色沉淀。

材料与仪器

器材:染色缸等。

试剂:

① A:无水醋酸钠(Sigma S-2889)9.2 g,L-酒石酸(Sigma T-6521)11.4 g,蒸馏水 950 ml,冰醋酸 2.8 ml,用 5 mol/L 氢氧化钠将 pH 调至 4.7~5.0,将总的体积定容到 1 L(5 mol/L 氢氧化钠:氢氧化钠固体 50 g,蒸馏水 250 ml)。

② B:萘酚 AS-BI 磷酸盐(Sigma N-2125,存储在 -20 ℃)0.1 g,乙二醇一乙醚(Sigma E-2632)5 ml。

③ C:亚硝酸钠(Sigma S-2252)1 g,蒸馏水 20 ml。

④ D副品红(Sigma P-3750)1 g,2N 盐酸 20 ml,煮到 60 ℃ 但不要沸腾,滤纸过滤(2 mol/L 盐酸:HCI 83 ml,蒸馏水 417 ml)。

步骤

TRAP 染色实验的基本过程可分为如下几步:

A. 将 A 加入 50 ml 的两个玻片染色缸预热到 37 ℃。

B. 在一个玻片染色缸中加入 B 0.5 ml,放入玻片,在 37 ℃ 下孵育 45 分钟。

C. 在时间快到时将 1 ml C 和 1 ml D 混合在一起,搅拌 30 秒后静置 2 分钟。

D. 将 C/D 混合液加入另一个有 50 ml A 的缸中,直接放入第二步孵育后的玻片。

E. 室温孵育 5 分钟。

F. 取出玻片冲洗,用苏木素复染 40 秒,然后放入 0.05% 氨水中。

G. 脱水,透明,封片。

来源:丁香实验

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