简介
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶,对骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色可以了解破骨细胞的骨吸收情况。
原理
TRAP 染色实验的基本原理是应用偶氮耦联免疫组化分析法,抗酒石酸酸性磷酸酶酶活性部位显示红色反应。使用试剂盒,以萘酚二磷酸盐为底物,偶氮副品红为显色剂,TRAP 在酒石酸钾钠存在条件下可将萘酚 AS-BI 磷酸盐水解为萘酚 AS-BI,与显色剂结合形成红色沉淀。
材料与仪器
步骤
TRAP 染色实验的基本过程可分为如下几步:
A. 将 A 加入 50 ml 的两个玻片染色缸预热到 37 ℃。
B. 在一个玻片染色缸中加入 B 0.5 ml,放入玻片,在 37 ℃ 下孵育 45 分钟。
C. 在时间快到时将 1 ml C 和 1 ml D 混合在一起,搅拌 30 秒后静置 2 分钟。
D. 将 C/D 混合液加入另一个有 50 ml A 的缸中,直接放入第二步孵育后的玻片。
E. 室温孵育 5 分钟。
F. 取出玻片冲洗,用苏木素复染 40 秒,然后放入 0.05% 氨水中。
G. 脱水,透明,封片。
来源:丁香实验