简介
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）为破骨细胞的特异性标志酶，对骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可以了解破骨细胞的骨吸收情况。
原理
TRAP 染色实验的基本原理是应用偶氮耦联免疫组化分析法，抗酒石酸酸性磷酸酶酶活性部位显示红色反应。使用试剂盒，以萘酚二磷酸盐为底物，偶氮副品红为显色剂，TRAP 在酒石酸钾钠存在条件下可将萘酚 AS-BI 磷酸盐水解为萘酚 AS-BI，与显色剂结合形成红色沉淀。
材料与仪器
器材：染色缸等。
试剂：
① A：无水醋酸钠（Sigma S-2889）9.2 g，L-酒石酸（Sigma T-6521）11.4 g，蒸馏水 950 ml，冰醋酸 2.8 ml，用 5 mol/L 氢氧化钠将 pH 调至 4.7～5.0，将总的体积定容到 1 L（5 mol/L 氢氧化钠：氢氧化钠固体 50 g，蒸馏水 250 ml)。
② B：萘酚 AS-BI 磷酸盐（Sigma N-2125，存储在 -20 ℃）0.1 g，乙二醇一乙醚（Sigma E-2632）5 ml。
③ C：亚硝酸钠（Sigma S-2252）1 g，蒸馏水 20 ml。
④ D副品红（Sigma P-3750）1 g，2N 盐酸 20 ml，煮到 60 ℃ 但不要沸腾，滤纸过滤（2 mol/L 盐酸：HCI 83 ml，蒸馏水 417 ml）。
步骤
TRAP 染色实验的基本过程可分为如下几步：
A. 将 A 加入 50 ml 的两个玻片染色缸预热到 37 ℃。
B. 在一个玻片染色缸中加入 B 0.5 ml，放入玻片，在 37 ℃ 下孵育 45 分钟。
C. 在时间快到时将 1 ml C 和 1 ml D 混合在一起，搅拌 30 秒后静置 2 分钟。
D. 将 C/D 混合液加入另一个有 50 ml A 的缸中，直接放入第二步孵育后的玻片。
E. 室温孵育 5 分钟。
F. 取出玻片冲洗，用苏木素复染 40 秒，然后放入 0.05％ 氨水中。
G. 脱水，透明，封片。
来源：丁香实验
