【求助】用免疫荧光加激光共聚焦测beta-catenin核定位

大家好！我的试验是做wnt通路。最近遇到了一些困惑和实验技术上的一些问题，恳请大家帮忙。
1、我用western blot分别检测了beta-catenin在细胞中总蛋白、包浆蛋白和核蛋白的变化，药物处理后都有所降低，当时出现阳性结果后，很高兴，但一直没有及时总结试验结果。现在想写章时却发现结果很乱，如果都写进去，需要讨论的面就太广了啊。胞浆蛋白beta-catenin降低就说明降解增多，进入核减少（这点已由核蛋白减少验证了），对下游靶基因转录起到抑制作用，抓住这一点是不是就够发一篇文章啊。
2、另外胞浆蛋白的减少我在课题设计时没有考虑。在研究生课题设计里现在是否有必要把他的胞浆降解系统再加一部分实验啊？例如GSK-3b的变化等。
3、接着1，涉及我下边毕业论文的试验，如果还要加上总蛋白beta-catenin的结果，是不是还有必要做他的mRNA？那我这个药物作用的靶点就太多了吧（既在翻译水平，又在转导通路上）。是不是这个不应该在我的课题里边啊，因为我要研究的就是药物对wnt通路的作用。现在我对我的课题下一步的研究很混乱。望高人指点！
4、还有做wnt通路的同道，谁能帮我推荐一下用免疫荧光和激光共聚焦显微镜分析beta-catenin核定位时，beta-catenin一抗用哪家的以及型号吗？我用我买的santa cruz一抗，货号sc-7963只能胞膜着色，是抗体不对吗？
试验着急很是郁闷。 :(
望大家多多帮助！谢谢！
一名现在很是郁闷的硕士研究生

不一定是抗体不对，beta-catenin还可以与细胞膜上的E-cadherin结合形成复合物，定位在细胞膜附近，参与细胞间黏附。在某些细胞中E-cadherin减少会引起beta核定位增加。

供参考。

谢谢楼上。但是我看到好多人都在做免疫荧光加激光共聚焦测beta-catenin核定位，为什么我就总是包膜着色呢？或是方法不对吗？我的研究重点在wnt通路，没有考虑E-cadherin的变化，所以希望能够得到胞浆和胞核着色的结果。

1.胞浆beta-catenin减少，胞核beta-catenin也减少，这个结果我觉得挺好的，尤其是胞核beta-catenin减少，能说明对下游靶基因转录水平起到抑制作用。但能否发文章还要看你文章要发什么级别以及实验要说明的重点问题是什么了，同时也不知道你是怎么检测胞浆和胞核beta-catenin量的，楼主能否介绍一下？
2.做wnt信号，有必要检测GSK-3b的变化，如果时间允许，就做一下，很多公司都有抗体，如Santa cruz，millipore等。
3.问问你的老板、师兄师姐。
4.我买的是博士德的，主要定位在胞核，但做了两次胞浆都不明显，也在找原因，不知对你有否帮助？

要染细胞核蛋白，适当增加细胞打孔时间。抗体我们用的是Cell Signal的

谢谢大家！
1、胞浆beta-catenin减少，胞核beta-catenin也减少，我用的试验方法是Western Blot，效果挺明显的。
2、用激光共聚焦做核定位时，用0.5%Triton打孔了，不知道是不是做的不够好，我再多试试！

楼主您好，不知后来您的激光共聚焦胞核中beta-catenin定位情况怎样，我也是做wnt通路相关，最近刚获得一次共聚焦实验结果，想和楼主交流讨论一下。