【求助】关于beta-catenin
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请教各位高手,小弟在实验中发现beta-catenin在细胞核内表达增高,但按照事先的推测,处理了以后会下调该基因的表达,所以有点反常。就想请教一下关于核内beta-catenin增高或者说转位都见于什么情况?考虑何种情况?
非常感谢各位。
非常感谢各位。
是用的什么方法?提取核蛋白,western?还是免疫组化?
免疫组化有时的结果不是很可靠。
核内beta-catenin增高或者说转位通常见于增殖旺盛的肿瘤细胞,或激活上游信号通路使beta-catenin从胞浆的降解复合物解脱出来入核。
免疫组化有时的结果不是很可靠。
核内beta-catenin增高或者说转位通常见于增殖旺盛的肿瘤细胞,或激活上游信号通路使beta-catenin从胞浆的降解复合物解脱出来入核。
我想知道你是用什么方法发现beta-catenin在细胞核内表达增高的>?????
是在研究一种抗肿瘤药物的抗癌机制时发现的,经过提取核蛋白做western blot和免疫荧光证实的,确实令自己感到不可思议,下一步真的不知道该怎么做了,还望高人多多指点了。
发现异常也许是好事啊,也许会有新的发现呢
我想请教各位同道一个问题。我也是用免疫荧光(激光共聚焦显微镜)观察beta-catenin的亚细胞定位。做了多次都是只有细胞膜着色,后来发现与我买的beta-catenin一抗(中杉金桥分装的santa cruz的产品)说明书上的结果一致。请问大家做beta-catenin免疫荧光用的是哪里的抗体啊,或者是我的方法有问题吗?我也用0.5%TritonX-100打孔了,仍不行。我在这里先谢谢各位了!
天天1999 wrote:
我想知道你是用什么方法发现beta-catenin在细胞核内表达增高的>?????
用报告基因嘛
pTOPflash和pFOPflash
再结合免疫荧光
文献一起发送
第二部分
我想请教各位同道一个问题。我也是用免疫荧光(激光共聚焦显微镜)观察beta-catenin的亚细胞定位。做了多次都是只有细胞膜着色,后来发现与我买的beta-catenin一抗(中杉金桥分装的santa cruz的产品)说明书上的结果一致。请问大家做beta-catenin免疫荧光用的是哪里的抗体啊,或者是我的方法有问题吗?我也用0.5%TritonX-100打孔了,仍不行。我在这里先谢谢各位了!
还有一种方法不知有没有人试过,就是把beta-catenin构建到pEGFP-N3类载体中,表达融合蛋白,把载体转入细胞,然后加入你的药物。荧光显微镜下观察进核情况。
如果beta-catenin抗体不好使,或者EGFP太大影响定位的话,还可以构建Flag标签类载体,转染细胞,加入药物,用抗Flag抗体免疫荧光检测,荧光显微镜下观察就好了。
如果beta-catenin抗体不好使,或者EGFP太大影响定位的话,还可以构建Flag标签类载体,转染细胞,加入药物,用抗Flag抗体免疫荧光检测,荧光显微镜下观察就好了。
但按照事先的推测,处理了以后会下调该基因的表达
我觉得科学不能有事先的推测的结果,这样容易受思维定势的影响,而忽略了新发现
我觉得科学不能有事先的推测的结果,这样容易受思维定势的影响,而忽略了新发现
我打算用SAB的β-catenin(Ab-37)Antibody,说明书上说可以检测到总的β-catenin的水平。
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