【求助】关于beta-catenin
丁香园论坛
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请教各位高手，小弟在实验中发现beta-catenin在细胞核内表达增高，但按照事先的推测，处理了以后会下调该基因的表达，所以有点反常。就想请教一下关于核内beta-catenin增高或者说转位都见于什么情况？考虑何种情况？
非常感谢各位。
非常感谢各位。
是用的什么方法？提取核蛋白，western？还是免疫组化？
免疫组化有时的结果不是很可靠。
核内beta-catenin增高或者说转位通常见于增殖旺盛的肿瘤细胞，或激活上游信号通路使beta-catenin从胞浆的降解复合物解脱出来入核。
免疫组化有时的结果不是很可靠。
核内beta-catenin增高或者说转位通常见于增殖旺盛的肿瘤细胞，或激活上游信号通路使beta-catenin从胞浆的降解复合物解脱出来入核。
我想知道你是用什么方法发现beta-catenin在细胞核内表达增高的>?????
是在研究一种抗肿瘤药物的抗癌机制时发现的，经过提取核蛋白做western blot和免疫荧光证实的，确实令自己感到不可思议，下一步真的不知道该怎么做了，还望高人多多指点了。
发现异常也许是好事啊，也许会有新的发现呢
我想请教各位同道一个问题。我也是用免疫荧光（激光共聚焦显微镜）观察beta-catenin的亚细胞定位。做了多次都是只有细胞膜着色，后来发现与我买的beta-catenin一抗（中杉金桥分装的santa cruz的产品）说明书上的结果一致。请问大家做beta-catenin免疫荧光用的是哪里的抗体啊，或者是我的方法有问题吗？我也用0.5%TritonX-100打孔了，仍不行。我在这里先谢谢各位了！
天天1999 wrote:
我想知道你是用什么方法发现beta-catenin在细胞核内表达增高的>?????
用报告基因嘛
pTOPflash和pFOPflash
再结合免疫荧光
文献一起发送
第二部分
我想请教各位同道一个问题。我也是用免疫荧光（激光共聚焦显微镜）观察beta-catenin的亚细胞定位。做了多次都是只有细胞膜着色，后来发现与我买的beta-catenin一抗（中杉金桥分装的santa cruz的产品）说明书上的结果一致。请问大家做beta-catenin免疫荧光用的是哪里的抗体啊，或者是我的方法有问题吗？我也用0.5%TritonX-100打孔了，仍不行。我在这里先谢谢各位了！
还有一种方法不知有没有人试过，就是把beta-catenin构建到pEGFP-N3类载体中，表达融合蛋白，把载体转入细胞，然后加入你的药物。荧光显微镜下观察进核情况。
如果beta-catenin抗体不好使，或者EGFP太大影响定位的话，还可以构建Flag标签类载体，转染细胞，加入药物，用抗Flag抗体免疫荧光检测，荧光显微镜下观察就好了。
如果beta-catenin抗体不好使，或者EGFP太大影响定位的话，还可以构建Flag标签类载体，转染细胞，加入药物，用抗Flag抗体免疫荧光检测，荧光显微镜下观察就好了。
但按照事先的推测，处理了以后会下调该基因的表达
我觉得科学不能有事先的推测的结果，这样容易受思维定势的影响，而忽略了新发现
我觉得科学不能有事先的推测的结果，这样容易受思维定势的影响，而忽略了新发现
我打算用SAB的β-catenin（Ab-37）Antibody，说明书上说可以检测到总的β-catenin的水平。
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