【求助】研究某个蛋白通过ER起作用的方法
丁香园论坛
1215
我看到一片paper是研究某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖。为了证明这一点，作者向不表达ER的293T细胞中转染ER，ER reporter vector和这个蛋白的表达载体。我想问的是，他为什么不向乳腺癌细胞中转染质粒呢？是因为乳腺癌细胞本身表达ER吗？这有什么影响呢？
外源的大量转染只是为了确定一下现象在过表达中是否存在，乳腺癌细胞中ER 阴性或者阳性时ER的含量，不同细胞系中含量也是不一样的
那在乳腺癌细胞中转染ER，ER reporter vector和这个蛋白的表达载体，是不是更能说明问题？因为文章是为了证明，某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖。毕竟293T细胞和乳腺癌细胞还是不一样的。
由于细胞内的通路都是网络化的，因此一个因素影响细胞增殖，其具体的机制是有多种可能的。lz说的这个实验我觉得他做的非常出色，思路很清晰啊。为什么不在乳腺癌中做，他肯定也在乳腺癌细胞做了，但是你不能直接将结果就锁定在ER上，即使ER通路的活性和总量有改变，因为你的阴性对照组也是有ER的。而将该实验换到293T中，由于293是胚胎肾细胞，功能性与乳腺癌细胞是差很多的，拿它做同样的实验也就是为了将实验的背景环境条件尽可能的改变，就加入ER一个同样的条件，这时出了与乳腺癌相似的结果，不久使“某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖”的结论更有说服力了么？
楼上这位兄弟说的有道理。但是他的文章里没有提到做乳腺癌细胞转染的试验，我觉得还是应该加上这个实验比较合理。因为在293T中转染，这说明这个蛋白能够抑制ER信号通路，并不能直接说明抑制ER信号通路和抑制乳腺癌细胞增殖的必然联系。
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
