【求助】流式细胞术和细胞信号通路的联系?
丁香园论坛
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想研究下肿瘤细胞的信号通路,不知道研究信号通路的方法可否与流式细胞术结合起来?请大家知道下!
这是一个不错而且可行的想法。
细胞经过固定/穿透(fixation/permeabilization)之后,荧光标记的抗体可以进入细胞浆以及细胞核中,识别,比如说,蛋白质的磷酸化位点。之后,通过流式细胞仪检测荧光强度,就可以分析信号激活的程度。
而这种方法的主要优点就是,可以同时标记细胞的表面抗原,进而分析信号通路在不同的细胞群的激活程度。目前认为肿瘤细胞也是异质性的,而肿瘤干细胞只是其中很少的一部分。肿瘤干细胞相对于分化成熟的大部分肿瘤细胞而言,在genetic, epigenetic水平,以及对于外界微环境的反应均有所区别。在一定程度上可以通过细胞内信号通路的研究而分析干细胞和其他细胞的区别。
但也有缺点,就是有一部分membrane markers在fixation/permeabilization之后,不能保持其scatter property. 因此,protocol需要很好的优化。
对于更多的信息,可以查阅Prof. Garry P Nolan (Stanford University)研究组的相关文献。附其中一篇文献,比较早期但是方法比较详细。
祝 试验顺利!
细胞经过固定/穿透(fixation/permeabilization)之后,荧光标记的抗体可以进入细胞浆以及细胞核中,识别,比如说,蛋白质的磷酸化位点。之后,通过流式细胞仪检测荧光强度,就可以分析信号激活的程度。
而这种方法的主要优点就是,可以同时标记细胞的表面抗原,进而分析信号通路在不同的细胞群的激活程度。目前认为肿瘤细胞也是异质性的,而肿瘤干细胞只是其中很少的一部分。肿瘤干细胞相对于分化成熟的大部分肿瘤细胞而言,在genetic, epigenetic水平,以及对于外界微环境的反应均有所区别。在一定程度上可以通过细胞内信号通路的研究而分析干细胞和其他细胞的区别。
但也有缺点,就是有一部分membrane markers在fixation/permeabilization之后,不能保持其scatter property. 因此,protocol需要很好的优化。
对于更多的信息,可以查阅Prof. Garry P Nolan (Stanford University)研究组的相关文献。附其中一篇文献,比较早期但是方法比较详细。
祝 试验顺利!
谢谢指点哦 !
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