免疫组化染色之DAKO EPOS法

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如何实现完美的免疫组化实验

自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKO EPOS先进的多聚螯合物免疫组化 一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。

1.、材料和方法

(1)材料

均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶质瘤8例。用10%甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。

(2 )试剂

EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生产，广州基因公司提供。

(3 )方法

LSAB法(略)。

DAKOEPOS法：切片常规脱蜡至水;3%过氧化氢室温孵育5min;PBS 缓冲液洗3次，每次5min;用DAKO EPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室温孵育30～60min;PBS缓冲液洗3次，每次5min;DAB显色，水洗;苏木素复染、脱水、封片。

2、结果

DAKO EPOS一步法染色结果阳性物质呈棕黄色，LCA定位于细胞膜，Vimentin、Cytokeratin、及S�100定位于细胞浆，苏木素复染细胞核 呈蓝色，背景清晰，非特异性染色少，EPOS法与LSAB法比较，不但简化了操作步骤，而且大大缩短了染色时间，具有更佳的对比度，结果比较如表1所示。

3、讨论

DAKO EPOS一步染色法是将特异性抗体和酶标分子结合于柔韧的多聚螯合物，使特异性抗体和检测系统结合为一种试剂，具有高灵敏性、高特异性、省时、减少处理步骤、重复性好、即用、低背景染色的优点。

(1)省时

传统的PAP、ABC或LSAB法整个染色程序时间在2～3h之间，而DAKOEPOS一步法染色时间只需40min，大大地节约了时间，而且省去了很多繁琐的步骤。值得一提的是，利用DAKOEPOS一步法加上微波快速处理，整个染色制片过程仅用10min即可，特别适合于冰冻切片急诊手术的鉴别诊断，只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin几种抗体，就可以区分该肿瘤是来源于上皮、淋巴、神经或间叶组织的肿瘤，为手术的进一步进行和及时用药治疗提供了更为可靠的依据。

(2 )低背景

从表1中可以发现，DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低，其原因是前者只要一步即可，HRP直接结合在特异性的抗体上，无需引入桥抗，后者则需要三步，必需借助桥抗的连接且HRP是结合在非特异性的复合物上，染色步骤增多，导致背景染色加深。

(3 )高敏感性和高特异性

不同种系的IgG分子结构是相似的，因此抗一种动物的IgG可能与另一种动物的IgG会引起交叉反应。而DAKO EPOS法将一抗和检测系统结合为一种试剂，避免了动物间IgG的交叉反应，从而提高了敏感性和特异性。

此外，DAKO EPOS试剂是即用型产品，无需进行稀释，且以使用方便的滴瓶提供，减少了抗体的污染，更适合在实际操作中的应用。