原理
采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架,将特异性抗体和 HRP 结合在一起,形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物,该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时,只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂,孵育 30~60 min 即可完成。勿需再加酶标记第二抗体。
材料与仪器
石蜡切片
蛋白酶 PBS 蒸馏水 H2O2 Dako EPOS HRP 试剂 DAB 树胶 二甲苯 乙醇
滴管 玻片
蛋白酶 PBS 蒸馏水 H2O2 Dako EPOS HRP 试剂 DAB 树胶 二甲苯 乙醇
滴管 玻片
步骤
1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。
2. 蛋白酶消化或抗原修复(AR),PBS 洗 3 min×3 次。
3. 0.3% 过氧过氢(H2O2)处理 5 min。
4. 蒸馏水洗,置于 PBS 中洗 5 min。
5. 加入相应的 Dako EPOS/HRP 试剂,室温孵育 30~60 min。
6. PBS 洗 3 min×3 次。
7. 0.04% DAB- 0.03% H2O2 显色 8~12 min。
8. 水洗,复染,常规树胶封片。
来源:丁香实验