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简介
长期以来,许多的研究者希望 IHC 方法更敏感、更稳定、更简单,要求多步检测系统简化,但敏感性要进一步提高,使这一技术面临巨大的挑战。在实践中,往往是步骤减少了,敏感性也降低,这是一对矛盾。
一种新的多聚螯合物酶二步法在 1995 年被隆重推出,该方法与简单的二步法相比较,具有很高的敏感性、稳定性和特异性。
另一种是以多聚糖为骨架的多聚螯合物,主要用于 PowerVision 法,其敏感性好于 EnVision 法。
第三种是以氨基酸类为骨架的多聚螯合物,主要用于 UIP(universal immunoperoxidase polymer)法,其敏感性基本与 PowerVision 法相同。
内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》
来源:丁香实验
操作方法
1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 蛋白酶消化或抗原修复(AR),PBS 洗 3 min×3 次。3. 0.3% 过氧过氢(H2O2)处理 5 min。4. 蒸馏水洗,置于 PBS 中洗 5 min。5. 加入相应的 Dako EPOS/HRP 试剂,室温孵育 30~60 min。6. PBS 洗 3 min×3 次。7. 0.04% DAB- 0.03% H2O2
EnVision 法1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后,常规二甲苯、乙醇脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。3. PBS 洗 3 min×3 次。4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。5. 适当稀释特异性一抗,37℃ 孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。6. EnVis
UIP 法1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后,常规二甲苯、乙醇脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。3. PBS 洗 3 min×3 次。4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。5. 适当稀释特异性一抗,37℃ 孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。6. N-His
PowerVision 法1. 4 μm 常规石蜡切片脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。3. PBS 洗 3 min×3 次。4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。5. 适当稀释特异性一抗,室温孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。6. 滴加山羊抗小鼠(或兔)IgG-HRP 多
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