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PowerVision 法

相关实验:多聚螯合物酶组化实验

最新修订时间:

原理


PowerVision 系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,因此相对分子质量较小。其特点是简便、敏感。其操作流程同 EnVision 法,但一抗的稀释度可在 EnVision 法基础上作进一步稀释。


材料与仪器

石蜡切片
蛋白酶 PBS H2O2 树胶 二甲苯 乙醇 特异性一抗 PowerVision 复合物 DAB 苏木精 盐酸乙醇
滴管 玻片

步骤

1. 4 μm 常规石蜡切片脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。


2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。


3. PBS 洗 3 min×3 次。


4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。


5. 适当稀释特异性一抗,室温孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。


6. 滴加山羊抗小鼠(或兔)IgG-HRP 多聚物(PowerVision),室温孵育 30 min,PBS 洗 3 min×3 次。


7. 0.04% DAB- 0.03% H2O2 显色 8~12 min。


8. 水洗后,苏木精衬染 1~3 min,水洗蓝化 5~10 min,盐酸乙醇分化 5 s,水洗 5 min,系列乙醇脱水,常规树胶封片。


9. 观察结果。

来源:丁香实验

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