丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

噬菌体效价的测定

互联网

9017

实验四十九 噬菌体效价的测定

  一、目的要求

  学习噬菌体效价测定的基本方法。

  二、基本原理

  噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法,一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上,一个噬菌体产生一个噬菌斑,因此,能进行噬菌体的计数。

  三、器材

  大肠杆菌18小时培养液,大肠杆菌噬菌体10-2 稀释液(用肉膏蛋白胨液体培养基稀释);

  含0.9ml液体培养基的小试管4支,肉膏蛋白胨琼脂平板(10ml培养基,2%琼脂,作底层平板用)5个,含4ml琼脂培养基的试管(0.7%琼脂,作上层培养基用)5管,灭菌小试管5支,灭菌1ml吸管10支,48℃水浴箱等。

  四、操作步骤

  1.稀释噬菌体

  (1)将4管含0.9ml液体培养基的试管分别标写10-3 ,10-4 ,10-5 ,和10-6

  (2)用1ml无菌吸管吸0.1ml10-2 大肠杆菌噬菌体,注入10-3 的试管中,旋摇试管,使混匀。

  (3)用另一支无菌吸管从10-3 管中吸0.1ml加入10-4 管中,混匀,余类推,稀释至10-6 管如图Ⅻ-3所示。

  2.噬菌体与菌液混合

  (1)将5支灭菌空试管分别标写10-4 ,10-5 ,10-6 ,10-7 和对照。

  (2)用吸管从10-3 噬菌体稀释管吸0.1ml加入10-4 的空试管内,用另一支吸管从10-4 稀释管内吸0.1ml加入10-5 空试管内,如图Ⅻ-3直至10-7 管。

  (3)将大肠杆菌培养液摇匀,用吸管取菌液0.9ml加入对照试管内,再吸0.9ml加入10-7 试管,如此从最后一管加起,直至10-4 管,各管均加0.9ml大肠杆菌培养液。

  (4)将以上试管旋摇混匀。

  3.混合液加入上层培养基内

  (1)将5管上层培养基溶化,标写10-4 、10-5 、10-6 、10-7 和对照。使冷却至 48℃,并放入48℃水浴箱内。

  (2)分别将4管混合液和对照管对号加入上层培养基试管内。每一管加入混合液后,立即旋摇混匀。

  4.接种了的上层培养基倒入底层平板上

  (1)将旋摇均匀的上层培养基迅速对号倒入底层平板上,放在台面上摇匀,使上层培养基铺满平板。

  (2)凝固后,置37℃培养。

  5.观察平板中的噬菌斑,将每一稀释度的噬菌斑数目记录于实验报告表格内,并选取 30—300个噬菌斑的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体数(效价)。

  噬菌体效价=噬菌斑数×稀释倍数×10

  五、实验报告

  1.结果

  (1)记录平板中每一稀释度的噬菌斑数于下表中。

  (2)噬菌体效价是多少?

  2.思考题

  (1)什么因素决定噬菌斑的大小?

  (2)测定噬菌体的效价,操作时要注意些什么才能测定准确?

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序