噬菌体效价测定法

一 . 点滴法

 

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养 16~24 小时。

 

2. 取 300 μ l 寄主细菌悬浮液加入 5 ml 冷却至 45 ℃ 的 0.7 ﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺于已凝固的 1.8 ﹪琼脂培养基上，并静置 30 分钟以上使其凝固。

 

3. 以 1% peptone 为稀释液，将噬菌体原液做 10 倍序列稀释，一般稀释至 107 倍即可。

 

4. 将平板划分为八个区域，以 pipetman 取不同稀释倍数之噬菌体稀释液各 1 μ l ，分别接种于不同的区域上。

 

5. 将平板置于适合的温度下，一般培养 8~24 小时，待溶菌斑产生后观察并计算其数目。一般噬菌体浓度太高的区域会融合成一个大的溶菌斑，而浓度适中的区域会形成肉眼可观察的溶菌斑。

 

6. 噬菌体效价 (pfu/ml) ＝溶菌斑数×稀释倍数×取样量折算数

 

例如：噬菌体原液稀释倍数为 106 ，取样测定量为 0.001 ml ( 则取样量折算数为 1000) ，三个滴定点的溶菌斑数目分别为 15 、 18 、 16 ，则噬菌体原液的效价为：

 

1/3(15 18 16) × 106 × 1000 ＝ 1.63 × 1010 (pfu/ml)

 

 

 

 

 

二 . 双层琼脂培养法

 

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养 16~24 小时。

 

2. 以 1% peptone 为稀释液，将噬菌体原液做 10 倍序列稀释，一般稀释至 107 倍即可。

 

3. 取噬菌体稀释液 100 μ l 与寄主菌液 300 μ l 均匀混合，静置 15 分钟使其感染。

 

4. 将上述混合液加入 5 ml 冷却至 45 ℃ 的 0.7 ﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺于已凝固的 1.8 ﹪琼脂培养基上。

 

5. 将平板置于适合的温度下，一般培养 8~24 小时，待溶菌斑产生后观察并计算其数目。

 

6. 噬菌体效价 (pfu/ml) ＝溶菌斑数 ×稀释倍数 ×取样量折算数

 

例如：噬菌体原液稀释倍数为 107 ，取样量测定量为 0.1ml ( 则取样量折算数为 10) ，三个平板的溶菌斑数目分别为 275 、 252 、 263 ，则噬菌体原液的效价为：

 

1/3(275 252 263) × 107 × 10 ＝ 2.63 × 1010 (pfu/ml)