全细胞DNA的制备

全细胞DNA是目的基因的材料来源，因此是必须得到的。我们通过学习细菌的全细胞DNA的制备，来了解DNA制备的基本知识。随后，我们再讲解质粒和噬菌体DNA的制备过程。

从细菌培养物中制备全细胞DNA的步骤：
（1）培养细胞的生长和收集（harvested）；
（2）细胞的破碎及内含物(content)的释放；
（3）从细胞抽提物（cell extract）中除去DNA外的其他所有成分；
（4）DNA溶液的浓缩(concentrated)。

细菌培养物的生长和收集
培养细菌需要培养基（culture medium），M9和LB培养基是两种典型的细菌培养基。
M9是一种确定成分培养基（defined medium），其中的所有成分是可知的。这种培养基包含的无机营养成分（inorganic nutrients)的混合物为细菌的生长提供基本元素，如氮，镁和钙，葡萄糖(glucose)提供碳源和能量。在实际应用中，还必须向M9中添加额外的生长因子，如微量元素和维生素。需要添加何种成分要视情况而定。
Luria-Bertani（LB）培养基是一种不确定成分培养基( medium)，胰蛋白胨(tryptone)负责提供氨基酸以及小的肽段，酵母提取物(yeast extract)负责提供氮源、糖以及其他有机和无机营养。类似LB的混合培养基不需要补充其他的营养成分，并且能够维持种类更多的细菌的生长。
当细菌培养物需要在严格准确的条件下进行生长时，必须使用确定成分培养基。然而，当培养物仅仅作为一种DNA的来源时，就没有必要用确定成分培养基，利用不确定成分培养基就更加合适。
利用LB培养基，在37 ℃、150～250 r/min的条件下，培养大肠杆菌细胞，大约每20 min分裂一次，直到培养基中的细胞达到2×109～3×109个/mL的最大密度。培养物的生长状况可以通过读取600 nm可见分光光度值（OD值）来监测，在该波长下，每个单位的OD值相当于0.8×109 个/mL。
通过离心可以收集细胞。相对较低的转速就能够使细菌在离心管（centrifuge tube）的底部聚集，这样一来上层的培养基就能够很容易到出。