免疫PCR
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免疫-PCR(immuno-PCR)是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统.它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测.
免疫-PCR试验的主要步骤有三个:
①抗原-抗体反应
②与嵌合连接分子结合
③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA).
该技术的关键环节是嵌合连接分子的制备.在免疫-PCR中,嵌合连接分子起着桥梁作用,它有两个结合位点,一个与抗原抗体复合物中的抗体结合,一个与质粒DNA结合,其基本原理与ELISA和免疫酶染色相似,不同之处在于其中的标记物不是酶而是质粒DNA,在操作反应中形成抗原抗体-连接分子-DNA复合物,通过PCR扩增DNA来判断是否存在特异性抗原.
免疫PCR优点为:
①特异性较强,因为它建立在抗原抗体特异性反应的基础上.
②敏感度高,PCR具有惊人的扩增能力,免疫PCR比ELISA敏感度高105倍以上,可用于单个抗原的检测.
③操作简便,PCR扩增质粒DNA比扩增靶基因容易得多,一般实验室均能进行.