Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞）的传代

Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞），是一种悬浮细胞。我的经验如下：

1、培养液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，青霉素100IU／1ml，庆大霉素100IU／ml；

2、培养条件：5％CO2，37度，30％湿度；

3、细胞复苏：要快速将冻存管放入37度水中，不断轻轻摇晃，直到细胞完全溶解，加入10ml左右的培养液，800～1000rpm，10分钟离心，之后倒掉液体，加入新的培养基就可以进行培养了；

4、细胞培养：起初进行传代时由于细胞刚刚复苏，长得比较慢，所以可以3～4天传一代，传过两代后，一般2～3天传一代，每次传代后在倒置显微镜下观察细胞形态，在传过几代合适的时候可以进行实验。

5、细胞冻存：1000rpm离心后，弃去液体，加入含有15％DMSO的冻存液，按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－80℃ 1小时）→液氮。

6、我在做细胞培养时的一些小经验：

（1）细胞培养箱在每使用1个月最好用酒精擦洗一次，这样可以减少污染；

（2）虽然说加样器放在紫外下照射会不准，但我们还是丢了一把1ml的加样器在超净台，没有拿出来过，我想这样也许会减少污染；

（3）小牛血清我们用的是国产的，所以在一开始的时候加了15％的小牛血清，但细胞总是长不好，后来摸索条件，把小牛血清的量调到了20％，细胞生长旺盛；

（4）HEPES虽然贵点，但加上去后细胞会长的不错；

（5）在超净台操作前要用0.1％的新洁尔灭或75%酒精擦手。