B16鼠黑色素瘤细胞培养的经验

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。

细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。

传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、或变形。消化用胰酶0.25%，可以用含EDTA的，效率更高一点。

消化步骤：弃血清——用D-hank's洗一遍，两管就够——加胰酶——镜下观察边晃动——细胞开始变形即可——弃胰酶，不含EDTA者直接加含血清培养基也可——按次序吹打每个角落2-3遍——镜下看成单细胞悬液（否则再吹）——弃去大部分（留1/4—1/8即可）——加适量培养基——继续培养。

注意：不提倡据经验按消化时间来估计是否消化完全。不同情况下细胞的消化时间不同，比如：胰酶的活力、胰酶的温度、是否含EDTA、细胞的活力、细胞的密度等等。