B16细胞的传代
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细胞增殖快非常好养,但是要及时换液,否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候,天天都在换液,两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%,个人感觉效果比较好一点。
消化步骤:吸出培养液,加入PBS洗涤(视培养瓶大小加入相应的量,25CM加入1-2ML)而后加一次胰酶(25CM培养瓶加0.6ML)作用2-3分钟,轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。
要一直在显微镜下观察,以防消化过头,等细胞从梭形变成椭圆形(或是棱角变钝),本来连成片的细胞之间开始有小小的空间,细胞与细胞好象是一粒粒的,界限清楚,这时是消化的最佳时机。(细胞的活力最好,又非常容易吹打)加入培养液进行吹打十几次即可。
如果消化到细胞全部飘起来,就消化的稍微有点过了。如果细胞的形态还是老样子,就消化的有点不足,吹打起来十分费力,有大片的细胞就会贴在壁上,起不来,而且很不均匀。只好重新加胰酶消化。
还有就是细胞长的比较密时,胰酶可以比平时多加一点,消化时间适当延长。