如何使PC12细胞贴壁更牢
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丁香园ivy_mayan的问题:
在做PC12的H2O2损伤模型时,由于细胞经过H2O2的冲击,大多活性不好了,所以贴壁性变差,结果在测MTT时由于要去掉上清液,细胞会被一同吸走,这样所测吸光值就不准了,请问大家,怎么可以使PC12贴壁更牢(即使经过损伤冲击)?
丁香园george的观点:
1.细胞培养板的选择:一定要用进口的培养板,国产的大多贴不好。
2.尽量使细胞处于良好的状态,包括培养液要新鲜配制备,注意PH值,提高牛血清的浓度。
丁香园midas的观点:
1.用PLL或鼠尾胶包被扳子!
2.H2O2浓度越大,作用的时间应该越短。
3.MTT时,不必要完全吸去上清液(当然每个孔吸出的量应该一样多),尽量不要洗掉细胞。
丁香园drcici的观点:
细胞的贴附状态涉及很多方面,细胞的类型,细胞本身的状态,培养条件以及培养板等因素都可以影响细胞的贴附。
除了以上高手的经验外,我想还要注意PC12的密度,一般良好状态的PC12生长迅速,可以在2~3天就可以长满一个中皿,如果你用96孔板的话,长满的时间应该更短。但是长得过满的细胞状态并不好,容易脱落,不知你的PC12是以何种密度接种的,什么时间加双氧水?最好是在PC12长至70-80%时加双氧水。
还有加入的双氧水的温度,也要与培养温度相同,去除双氧水后,要用培养液把细胞洗2-3遍。
丁香园ivy_mayan的问题:
具体我是这样操作的:96孔板
以2x10的五次方密度接种细胞,24小时后加入不同浓度的h2o2(50-500UM), 作用不同时间后(0-8h)加入MTT,孵育4h后去上清,加入DMSO溶解结晶,测490nm下的吸光值。
我有以下疑问:
1)板我已经过poly-l-lys处理过,但是细胞贴壁还是不好,如何解决?
2)加入MTT前是否要把培养液去掉, 并用PBS洗两遍以彻底去除H2O2及血清的影响,只是这样一来细胞会丢失很多,该如何解决?