细胞计数和台盼蓝染色

血球计数板每一大方格长为1mm ，宽为1mm ，高为0.1mm ，体积为0.1mm3 ，可容纳的溶液是0.1l ，那么每ml 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000 倍。

实验步骤

（一）准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干。

（二）制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。要求细胞密度不低于104 /ml ，若细胞数很少，应将悬液离心（1000rpm ，2min ），重悬浮于少量培养液中。

（三）加样：将盖玻片盖在计数板两槽中间。用吸管轻轻吹打细胞悬液，吸取少量细胞悬液，在计数板上盖玻片一侧加细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样。

（四）计数：在显微镜下，用10 ×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。

（五）计算：将计算结果代入下式，得出细胞密度。

细胞数/ 毫升原液= （4 大格细胞数之和/4 ）×104 ×稀释倍数

注意事项

（一）消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液，否则会影响细胞计数结果。

（二）取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时，特别应该注意这一点，否则前后计数结果会有很大误差。

（三）镜下计数时，遇到2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团占10% 以上，说明消化不充分；或细胞数少于200 个/10mm2 或多于500 个/10mm2 时，说明稀释不当，需重制备细胞悬液、计数。

培养细胞活力的检测

台盼蓝排斥实验

1.制备单个细胞悬液，适当稀释；

2.向细胞悬液中加入0.4% 台盼蓝溶液，使台盼蓝终浓度为0.04% ；

3 ．在三分钟内用血球计数板分别计数活细胞和死细胞，死细胞被染成淡蓝色。

注意事项：在三分钟内完成死细胞计数，否则部分活细胞也会被染色，影响实验的准确性。

(责任编辑：大汉昆仑王)