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果蝇单因子杂交实验(图)

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11109

根据孟德尔的颗粒遗传学理论,基因是一个独立的结构与功能单位.在杂合状态时不发生混淆,完整地从一代传递到下一代.由该基因的显隐性决定其在下一代的性状表现。单因子杂交是指一对等位基因间的杂交。孟德尔第一定律指出,一对杂合状态的等位基因保持相对的独立性,其自交后代中表型分离比为 3 : l 。

本实验将观察果蝇单因子杂交后代的表型及其分离情况。

一、实验目的

1、 通过实验深刻理解孟德尔分离定律。

2、 掌握果蝇的杂交技术。

二、实验材料

黑腹果蝇 ( Drosophila melanogaster ) 。

野生型:长翅果蝇 (+/+)

突变型:残翅果蝇 (vg / vg)

野生型果蝇的双翅为长翅 (+/+) ,翅长超过尾部。残翅果蜗 (vg / vg) 的双翅几乎没有,只留少量残痕,无飞翔能力。

三、仪器设备

立体解剖镜,恒温培养箱,天平,培养瓶及麻醉瓶,毛笔及白瓷板。

四、药品试剂

乙醚,玉米粉,琼脂,红糖,酵母粉,丙酸。

五、实验步骤

1 、交配方式:用纯系残翅果蝇 ( 雌 ) 与长翅果蝇 ( 雄 ) 交配,此为正交实验;反交实验以长翅果蜗为母本、残翅果蝇为父本,由此得 F1 代。 F2 代雌雄个体相互交配, F2 代出现性状分离,如下图所示。

2 、选野生型和残翅果蝇为亲本。雌蝇一定要选处女蜗,可在实验前 2-3 天陆续收集,雌雄个体分开培养.数目多少根据需要而定。

将雌雄果蝇放在一起培养,雌蝇的生殖器中有贮精囊,可保留交配所得的大量精子,雌蝇一次交配所得的精子,足够它多次排出的卵受精,因此在做杂交试验时,雌蝇必须选用处女蝇(没有交配过的雌蝇)。那么如何才能得到处女蝇呢?一般来说,刚羽化出来的果蝇在 12 小时之内是不进行交配的,所以在这段时间内选出的雌蝇即为处女蝇。为了保险起见,可以在羽化后的 8 小时内挑选。因此,在杂交实验开始的一段时间内,各实验小组要根据自己的实验设计,精心挑选处女蝇。为了操作方便,可以在每天晚上 22 : 00 ~ 23 : 00 将培养瓶内的成蝇杀死,次日早晨 8 : 00 ~ 9 : 00 对新羽化出的果蝇进行挑选。

3、首先把残翅处女蝇倒出麻醉,挑 5 只移到水平放置的杂交瓶中,再把长翅倒出麻醉,挑选 5 只雄蝇,移到上述杂文瓶中。等杂交亲本在杂交瓶中全部苏醒后,将杂交瓶直立,并移入 25 ℃ 温箱中培养。同时,按上述操作进行反交实验接种培养。注意按下述方式贴好标签:

4、7 天后,释放杂交亲本。

5 、再过 4-5 天, Fl 成蝇开始出现,观察 F1 翅膀 ( 表型 ) ,注意显、隐性关系,连续检查 2-3 天,并计数统计,或在释放亲本 7 天后集中观察。

6 、选取正、反交各 5 对 F1 雌雄果蝇,分别移入一新培养瓶 ( 这里不需用选取处女蝇 ) ,置 25 ℃ 温箱小培养。当看到培养瓶内有蛹出现时,及时将亲本处死,以防发生回交。

7 、 7 天后,释放 Fl 亲本。再过 4-5 天, F 2 代成蝇出现后,进行观察统计,可连续统计 7-8 天,观测数目在 200 只以上。被统计过的果蝇倒入水槽冲掉。

注意:无论是对 F 1 还是对 F 2 进行统计,都要及时进行,避免陆续羽化出的果蝇在培养瓶内交尾后将卵产在培养基内。因此要求实验者不断进行观察,只要有新羽化出的果蝇,就要及时取出,并进行统计和观察。

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