反向间接乳胶凝集反应原理及方法

一、原理

同炭凝，只是载体换为聚苯乙烯乳胶，它是一种由0.6μm～0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液，具有良好的吸附蛋白质的性能。

间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。

二、材料与试剂

1、聚苯乙烯乳胶

2、免疫血清

3、正常血清

4、标准抗原

5、待检抗原

6、0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液

硼砂 6.67g

硼酸 8.04g

H2O 加至 1 000ml

7、生理盐水

三、操作方法

1、乳胶液制备 取聚苯乙烯乳胶0.10ml，加灭菌蒸馏水0.40ml，再加pH8.2硼酸缓冲液2ml，混合后即为25倍稀释的乳胶液。

2、乳胶致敏 在上述乳胶液中滴加稀释的免疫血清0.20ml～0.70ml，边加边摇，当出现肉眼可见的颗粒后，仍继续加血清，直至颗粒消失，成为均匀的乳胶悬液为止。镜下检查应无自凝。使用时，应与一定稀释度的相应抗原出现阳性反应，与生理盐水出现阴性反应为合格。加防腐剂后，于冰箱内保存。注意防止冰冻。

同时以正常血清代替免疫血清进行乳胶致敏，以作对照。

3、取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成小格，滴加待检样品0.10ml，再滴加高免血清致敏乳胶0.01ml，以牙签或火柴杆混匀，在3min内判定结果。

四、结果判定

“＋＋＋＋”：全部乳胶凝集，成絮状团块，液体清亮。

“＋＋＋”：大部分乳胶凝集成较小的颗粒，液体清亮。

“＋＋”：半量乳胶凝集成细小颗粒，液体混浊。

“＋”：较少量的乳胶凝集成可见的细颗粒，液体混浊。

“－”：全部乳胶仍为均匀液体，无颗粒。

以“＋＋”作为该反应滴度的终点。