间接炭凝反应原理及方法

一、原理

间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体，将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上，形成炭粉抗体复合物，当炭血清与相应的抗原相遇时，二者发生特异性结合，形成肉眼可见的炭微粒凝集块。

目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。

二、材料与试剂

1、炭粉 

炭粉粒子最好大小在0.12mm～0.15mm，目前市场上出售的炭粉均不合要求，必须过300目/寸的标准筛以300r/min离心去沉淀，再以3 000r/min离心去上清，收集沉淀物；

2、高免血清；

3、待测标本；

4、灭活兔血清；

5、正常血清；

6．标准抗原；

7、0.05mol/L pH7.2PBS液；

8、1％硼酸的PBS液。

三、操作方法

1、炭致敏 

取湿炭粉0.25g（干粉0.10g），加入经56℃～60℃灭活30min的稀释高免血清3ml，充分摇匀，置37℃致敏30min，不时摇动，取出后用pH 7.2 PBS液洗涤3次。最后一次用含1％硼酸和1％兔血清的PBS液洗涤一次，离心去上清，再取此液3ml，混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理，以作对照。

致敏血清（加1/万硫柳汞防腐）于室温或4℃冰箱中保存，一年内有效。

2、取洁净玻璃板一块，以玻璃铅笔划成小格，加被检标本0.10ml，再加免疫炭血清0.05ml，充分混匀，静止1min~5min，判定结果。

同时设三个对照：

（1）免疫炭血清+标准抗原；

（2）正常炭血清+标准抗原；

（3）正常炭血清加待检抗原。

四、结果判定

在对照完全成立的情况下，判定本试验结果：

“＋＋＋＋”：炭粉全部凝集，液体完全清亮透明；

“＋＋＋”：炭粉大部分凝集，液体透明；

“＋＋”：炭粉一半凝集，液体较透明；

“＋”：炭粉微凝集，但与对照有差别，液体混浊；

“—”：炭粉不凝集，液体不透明；

炭凝以“＋＋”做为反应滴度的终点。