间接炭凝反应
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原理
间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生特异性结合,形成肉眼可见的炭微粒凝集块。
目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。
材料与试剂
1 .炭粉 炭粉粒子最好大小在 0.12mm ~ 0.15mm ,目前市场上出售的炭粉均不合要求,必须过 300 目/寸的标准筛以 300r / min 离心去沉淀,再以 3 000r / min 离心去上清,收集沉淀物。
2 .高免血清
3 .待测标本
4 .灭活兔血清
5 .正常血清
6 .标准抗原
7 . 0.05mol/L pH7.2PBS 液
8 . 1 %硼酸的 PBS 液
操作方法
1 .炭致敏 取湿炭粉 0.25g (干粉 0.10g ),加入经 56 ℃ ~ 60 ℃ 灭活 30min 的稀释高免血清 3ml ,充分摇匀,置 37 ℃ 致敏 30min ,不时摇动,取出后用 pH 7.2 PBS 液洗涤 3 次。最后一次用含 1 %硼酸和 1 %兔血清的 PBS 液洗涤一次,离心去上清,再取此液 3ml ,混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照。
致敏血清(加 1/ 万硫柳汞防腐)于室温或 4 ℃ 冰箱中保存,一年内有效。
2 .取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本 0.10ml ,再加免疫炭血清 0.05ml ,充分混匀,静止 1min~5min ,判定结果。同时设三个对照:
⑴免疫炭血清 标准抗原。
⑵正常炭血清 标准抗原。
⑶正常炭血清加待检抗原。
结果判定
在对照完全成立的情况下,判定本试验结果:
“++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明。
“+++” :炭粉大部分凝集,液体透明。
“++” :炭粉一半凝集,液体较透明。
“+” :炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊。
“—” :炭粉不凝集,液体不透明。
炭凝以“++”做为反应滴度的终点。