间接炭凝反应

互联网2013-11-14

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原理

间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体，将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上，形成炭粉抗体复合物，当炭血清与相应的抗原相遇时，二者发生特异性结合，形成肉眼可见的炭微粒凝集块。

目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。

材料与试剂

1 ．炭粉 炭粉粒子最好大小在 <chmetcnv>0.12mm </chmetcnv> ～ <chmetcnv>0.15mm </chmetcnv> ，目前市场上出售的炭粉均不合要求，必须过 300 目／寸的标准筛以 300r ／ min 离心去沉淀，再以 3 000r ／ min 离心去上清，收集沉淀物。

2 ．高免血清

3 ．待测标本

4 ．灭活兔血清

5 ．正常血清

6 ．标准抗原

7 ． 0.05mol/L pH7.2PBS 液

8 ． 1 ％硼酸的 PBS 液

操作方法

1 ．炭致敏 取湿炭粉 <chmetcnv>0.25g </chmetcnv> （干粉 <chmetcnv>0.10g </chmetcnv> ），加入经 <chmetcnv>56 ℃ </chmetcnv> ～ <chmetcnv>60 ℃ </chmetcnv> 灭活 30min 的稀释高免血清 3ml ，充分摇匀，置 <chmetcnv>37 ℃ </chmetcnv> 致敏 30min ，不时摇动，取出后用 pH 7.2 PBS 液洗涤 3 次。最后一次用含 1 ％硼酸和 1 ％兔血清的 PBS 液洗涤一次，离心去上清，再取此液 3ml ，混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理，以作对照。

致敏血清（加 1/ 万硫柳汞防腐）于室温或 <chmetcnv>4 ℃ </chmetcnv> 冰箱中保存，一年内有效。

2 ．取洁净玻璃板一块，以玻璃铅笔划成小格，加被检标本 0.10ml ，再加免疫炭血清 0.05ml ，充分混匀，静止 1min~5min ，判定结果。同时设三个对照：

⑴免疫炭血清 标准抗原。

⑵正常炭血清 标准抗原。

⑶正常炭血清加待检抗原。

结果判定

在对照完全成立的情况下，判定本试验结果：

“＋＋＋＋”：炭粉全部凝集，液体完全清亮透明。

“＋＋＋” ：炭粉大部分凝集，液体透明。

“＋＋” ：炭粉一半凝集，液体较透明。

“＋” ：炭粉微凝集，但与对照有差别，液体混浊。

“—” ：炭粉不凝集，液体不透明。

炭凝以“＋＋”做为反应滴度的终点。