大鼠幽门结扎性溃疡(pylorus ligated gastric ulcer) 标准操作规程(SOP)

名称：大鼠幽门结扎性溃疡(pylorus ligated gastric ulcer) 标准操作规程(SOP)

关键词：大鼠 幽门结扎性溃疡

目的：制备溃疡病模型,评价抗溃疡药的作用

原理：大鼠幽门结扎后胃液滞留,胃酸和胃蛋白酶对胃粘膜长时间消化,引起溃疡

主体内容：

1.器材：手术剪，缝合线(粗)，持针器，皮镊子，止血钳。铁丝鼠笼。手术灯，缝合用25 W照明灯3个。乙醚，麻醉钟罩及麻醉口罩。标本固定瓶，平皿。10%福马林。大鼠手术台4个。分光光度计。生理盐水。

2.溃疡指数测定

大鼠60只，体重150-250 g均可，一批实验体重范围<50g, ♂♀均可。 随机分为以下6组:

第1组:对照组， 生理盐水 5 ml/kg

第2组:赋形剂组 5 ml/kg

第3组:法莫替丁 40 mg/kg

第4组:受试药 低剂量

第5组:受试药 中剂量

第6组:受试药 高剂量

另取大鼠4只，为卫星组，处理同对照组，于手术后14、16h各处死2只，动态观察溃疡形成情况。

给药时间：如考虑为局部作用者，可术前给药；如为吸收作用者，结扎后在12指肠内给药。

大鼠禁食(不禁水) 48-72小时时在乙醚麻醉下结扎幽门。碘伏消毒皮肤，在剑突下一横指以下正中切一1 cm纵行切口，注意切开皮肤时先轻后重，以免割伤肝脏。止血钳钝行撑开腹膜，用止血钳（头子上穿硅胶管）夹出胃及十二指肠，找出胃和十二指肠交界处，在十二指肠下避开血管穿双线线（用缝合针），用双线结扎。注意结扎时确保线置于幽门与十二指肠连接处，如结扎位置低时，十二指肠液反流，可使病变减轻。间断缝合腹壁肌肉和皮肤（各三针）。每组结扎开始及结束时均记录时间。术后禁食、禁水，结扎后14-18小时（一般为18h）颈椎脱臼处死（处死时间视卫星组大鼠形成溃疡而定）， 将10%福马林注入胃内，固定30分钟后取胃沿胃大弯剪开，平铺后用摄象机摄象(放大7倍)，用真彩色图象分析仪测量溃疡面积(ulcer area)，按Okabe法计算溃疡指数(ulcer index)。溃疡指数计算如下:

溃疡面积(mm2 ): 1-12 13-25 26-37 38-50 ≥50或穿孔

溃疡指数: 1 2 3 4 5

试验时间安排举例：

2001年2月27日8:00am开始禁食，不禁水

2001年3月1日:7:30pm开始结扎（结扎后立即十二指肠内注入药物0.5 ml/kg），术后禁食水

2001年3月2日1：30取材。

3. 大鼠胃液分泌量、胃液酸度和胃蛋白酶的测定。

选体重为180-220 g 大鼠，雌雄各半，按性别、体重随机分组，禁食48小时，自由饮水， 灌胃给药30分钟后在乙醚麻醉下开腹结扎幽门， 6小时后收集胃液，离心分离胃液，按下法测定胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶活性：

(1) 胃液量及胃液 pH测定:

收集离心后的胃液，用量筒测量胃液体积，用酸度计测胃液pH值。

(2)游离盐酸及总酸度测定:

取5 ml胃液，用酸度计监测，用0.1N NaOH滴定至pH 7.0，记录所耗用的NaOH毫升数，计算游离盐酸。然后加入1%酚酞2滴为指示剂，再继续用0.1N NaOH滴定至出现酚酞色，记录所耗用的NaOH总量，计算总酸。

游离酸(mmol/L)=滴定5 ml胃液(至pH7.0)用去0.1N NaOH(ml) ×20

总 酸(mmol/L)=滴定5 ml胃液(至出现酚酞色)用去0.1N NaOH(ml)×20

总酸排出量(mmol/L•h)=总酸度×胃液体积÷6

(3)胃蛋白酶活性测定

取离心胃液0.1ml，加入1%牛血清白蛋白(0.1 N NCl配制) 1 ml.37℃温孵20分钟，加入2 ml 1%三氯乙酸，并在沸水中加热5分钟，冷却后过滤，取滤出液0.2ml，加入2 ml 0.1 N HCl、3.5 ml 0.6 N NaOH溶液，同时加入稀释后的Folin-酚试剂1.5 ml， 混匀、静置10分钟后在680 nm处测光密度。以酪氨酸标准曲线计算胃蛋白酶活性。以μmol/h酪氨酸表示胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性单位规定为每分钟生成 1 μmol 酪氨酸作为1个活性单位。