大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)

 

名称：大鼠灌注取脑 标准操作规程(SOP)

关键词：大鼠 灌注取脑

目的： 完整取出大鼠脑部（取材）

操作步骤

流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.

1 多聚甲醛的配置：

一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。

我们用的方法：加热至60～65℃固然融解的快，不过容易挥发，气味难闻，不是好的选者。我们是这样做的，感觉不错，在此强烈推荐：先配好pbs，称好相应的多聚甲醛，37c水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。

3 麻醉后开胸：暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳。箭头所指为右心耳。

4心尖插入灌注针头，剪开右心耳，开放静脉血。

5 夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。

6 先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。

7 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。

8 分离除去后颈部肌肉 。

9 用弯钳仔细剔除颅骨 。