大鼠灌注取脑标准操作规程

1、多聚甲醛的配置：

一般方法为：4％ 多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取 40g PFA 溶于装有 500ml DEPC 水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用 1.0mol/L 的 NaOH 值至 7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约 500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下 pH，过滤后定容至 1000ml，室温或 4℃ 保存备用。

2、我们用的方法：加热至 60～65℃ 固然融解的快，不过容易挥发，气味难闻，不是好的选者。我们是这样做的，感觉不错，在此强烈推荐：先配好pbs，称好相应的多聚甲醛，37c 水浴或温箱密封放置 2 天，就能全溶。

3、麻醉后开胸：暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳。箭头所指为右心耳。

4、心尖插入灌注针头，剪开右心耳，开放静脉血。

5、夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省多聚甲醛。多聚甲醛用 100ml 以下即可。

6、先灌注生理盐水约 100 ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。

7、灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。

8、分离除去后颈部肌肉。

9、用弯钳仔细剔除颅骨。