流式细胞仪检测健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的研究

T淋巴细胞亚群与机体的免疫功能相关，当免疫功能紊乱时，T淋巴细胞亚群在相对百分含量及绝对计数的数值检测上会出现异常。因此，T淋巴细胞亚群的检测对监控疾病的发生发展、了解疾病的机制、指导临床治疗都有及其重要的意义。以往文献以报道成年人淋巴细胞亚群计数研究较多，相关儿童的淋巴细胞亚群计数研究报道较少。本文采用流式细胞术方法，建立健康儿童T淋巴细胞亚群的百分含量及绝对计数分析正常参考值，希冀对临床诊疗有所帮助，现报告如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料 本组50例健康儿童外周血标本均来自我院体检者，男28例，女22例，年龄7个月～18周岁。

1.2 试剂 CD4FITC/CD8PE/CD3PeCy5、CD45APC及溶血素购自美国Coulter-Immunotech公司，TruCount 管购自美国BD公司。

1.3 仪器 FACS Vantage流式细胞仪（美国BD公司）。

1.4 方法
　　1.4.1 样品制备 50μl全血反相抽吸入TruCount管，加20μl荧光抗体，室温避光孵育20min；50μl溶血素及500μl蒸馏水分别与标本孵育各10min，待检。

　　1.4.2 流式分析 FACS Vantage流式细胞仪，配置氩离子激光器及氦-氖激光器，激发波长分别为488nm和633nm。采用CellQuestPro软件分析T淋巴细胞群体百分含量及细胞绝对计数，收集测定细胞10000个。

　　1.4.3 统计学方法 采用均数±标准差（x±s），方差分析。

2、结果

健康儿童T淋巴细胞（CD3+细胞群体）占淋巴群体的百分率为65.16±7.05%，绝对计数为2029.75±718.85个/μl全血，辅助性T淋巴细胞（CD3+、CD4+细胞群体）占淋巴群体的百分率为38.61±6.15%，绝对计数为1226.00±482.44个/μl全血，抑制性T淋巴细胞（CD3+、CD8+细胞群体）占淋巴群体的百分率为23.38±7.31%，绝对计数为639.30±270.77个/μl全血，CD4/CD8比值为1.86±0.80。

3、讨论

儿童由于其机体发育未完全成熟，与成年人相比，其免疫系统各淋巴细胞群体在相对及绝对数值上都存在着一定的差异，因此临床儿科领域需要有不同于成年人的淋巴细胞群体的相对及绝对的正常参考值。