吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
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吖啶橙区分活细胞
DNA
和
RNA
的荧光组织化学染色法
吖啶橙《acridine oran。AO)属于三环杂芳香类异嗜性阳离子荧光染料，主要以两种方式与核酸结合，一是嵌入核酸双链的碱基对之间；二是与单链核酸的磷酸发生静电相互作用。当吖啶橙与DNA或RNA结合时，
最大发射波长分别为525nm或650nm，产生绿色荧光或橙红色荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的一种常用荧光组织化学染料。下面介绍应用吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染色法。
1．溶液配制
(1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数月)
双蒸水 50ml
吖啶橙 50mg
(2)甲液
双蒸水 200ml
HCl 16ml
NaCl 1．74g
Triton X-100 0．2ml
(3)乙液
0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0)
双蒸水 100ml
Na2 HP04・12H20 4．51g
枸橼酸(无水柠檬酸) 0．71g
溶解后，依次加入以下试剂和吖啶橙浓缩液
NaCl(0．15mol／L) 0．87g
EDTA-Na(1mmol／1) 0．037g
吖啶橙浓缩液 0．6ml
加入吖啶橙浓缩液后，应尽早使用。
2．操作程序
(1)取0．2ml含10％小牛血清的细胞悬液，再与0．4ml冷“甲液”混合，振荡15秒；
(2)加入l.2ml"乙液”，充分混匀；
(3)于10分钟内，荧光显微镜观察，激发波长为488nm。
结果：DNA为黄绿色荧光，而RNA为橘红色荧光。如果同时进行DNA和RNA染色时，需用鳌合剂处理，使双链RNA变性，确保所有的RNA均为单链，而双链DNA不受影响，增加结果的可信性。鳌合剂以乙二胺四乙酸(EDTA)为佳
