Western Blot，如何成功优化？

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：

一抗浓度对实验结果的影响

抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)

样本：人 HeLa 细胞 (Fig.1)

A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.2 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

Fig.1

脱脂奶粉及 NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human PTP1B Antibody (Catalog # AF1366)

蛋白分离：人 HeLa 细胞 (Lane 1)，MCF-7 (Lane 2) 和 TF-1 (Lane 3)(Fig.2)

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 2% 脱脂奶粉和 0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.5 M NaCl

Fig.2

一抗浓度、一抗溶液中脱脂奶粉含量及印迹缓冲液中 NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human PTP1B Antibody (Catalog # AF1366)

2% 脱脂奶粉溶液中一抗浓度对实验结果的影响 (Fig.3)：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.3 mg/mL，溶于 2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.1 mg/mL，溶于 2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

Fig.3

5% 脱脂奶粉溶液中一抗浓度对实验结果的影响 (Fig.4)：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.3 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.1 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

Fig.4

印迹缓冲液中 NaCl 浓度对实验结果的影响 (Fig.5)：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0. 5 M NaCl

Fig.5

印迹溶液中 NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog# AF992)

样本：人 HeLa 细胞 (Fig.6)

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.5 M NaCl

Fig.6

我们为您推荐实验设计数据参考：

裂解缓冲液

蛋白酶磷酸酶抑制剂

电泳凝胶的制备

内参对照

转膜

显色

选择 R&D Systems 抗体的四大理由：

Purification-采用抗原亲和纯化的方式对抗体进行纯化，纯化后的抗体具有更好的特异性；

Antigens-使用重组蛋白作为制备抗体的免疫原，大大提高了抗体对抗原的特异性识别能力;

Specificity-批次间稳定性的严格控制，有效保证了 R&D Systems 目录抗体在识别抗原时的特异性；

Source-多种宿主来源，以及多种单抗或多抗的选择，为客户提供了更丰富、更贴心的选择。

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