酪蛋白的制备

一、目的

学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。

二、原理

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酶蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后，便可得到纯的酪蛋白。

三、器材

1．牛奶

2．离心机

3．抽滤装置

4．精密pH试纸或酸度计

5．电炉

6．烧杯

7．温度计

四、 试剂

1．95%乙醇

2．无水乙醚

3. 0.2MpH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液

A液：0.2M醋酸钠溶液

B液：0.2M醋酸溶液

称有机纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g,定容至1000ml

4.去A液1770ml,B液1230ml混匀，即得pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。

5.乙醇乙醚混合溶液：乙醇:乙醚=1:1（V/V）

五、操作

1.将100牛奶加热到4℃。边搅拌边缓缓加入预热至40℃的缓冲液，并调节pH之后，冷却至室温。以3000r/min离心10min。弃去上清液，得酪蛋白粗制品。

2.用水洗涤三次，3000r/min离心，弃去上清液。

3.在沉淀中加入乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏 漏斗 中抽滤。用乙醇-乙醚混合液沉淀两次，最后再用乙醚沉淀两次，抽干。

4.将沉淀摊开在表面皿上，干燥后得酪蛋白纯品。

5.准确称量后，计算含量，并与理论含量（3.5g/100ml）相比求出实际得率。酪蛋白含量g/100ml：牛乳(g%)