实验动物细菌学监测标准操作规程(SOP)

名称：实验动物细菌学监测标准操作规程(SOP)

关键词：实验动物细菌学监测

目的：规范实验动物细菌学监测的具体过程，确保监测结果可靠。

主体内容：

1. 标本的采集

正常动物细菌检测主要检查呼吸道和肠道，分别取气管分泌物及肠内容物做细菌培养检查。对于发病动物，采取其病变组织和脏器做细菌学检查。

2. 细菌的培养

细菌是单细胞的原核生物，绝大部分都可以在人工培养基上进行繁殖，只有少数例外，如泰泽病原体需在活细胞中繁殖。不同细菌种类所要求的最适生长条件不尽相同，有些细菌需在有氧的环境下才能生长，称为需氧菌；有些只能在无氧环境下生长，称为厌氧菌；还有一些细菌在有氧、无氧环境下都可以生长，称为兼性厌氧菌。

培养细菌的目的，是从不纯的被检材料中找出特定的细菌或全部细菌，这一过程称为分离培养。如果只是培养性质明确的一种细菌，则称为纯培养。为了从被检材料中分离出所要检查的细菌，可以利用多种性质不同的选择性培养基，检查各种不同的目的细菌。

（1）培养基的种类：按物理性状可把培养基分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基三种。

（2）细菌培养的方法：培养细菌的目的不同，其方法也不尽相同，通常把细菌的培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种：

①一般培养法 一般培养法又称需氧培养法，将已接种好的平皿、斜面或液体培养基等，置于37℃孵育箱内培养18～24h，一般细菌即可于培养基上生长。但也有少数生长缓慢的细菌，需培养2～7d甚至更长时间才能生长。

②二氧化碳培养法 某些细菌如脑膜炎奈毖氏菌、布鲁杆菌及肺炎支原体等，需要在一定的二氧化碳环境下才能良好生长，即二氧化碳培养法，常用的有二氧化碳培养箱、烛缸法、重碳酸钠—盐酸法。

③厌氧培养法 有些细菌只能在无氧环境下生长，即厌氧培养法，目前常用的厌氧培养法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱等。

3. 细菌的鉴定和分类

把获得纯培养的细菌进行一系列生物学特性的检查，并确定其分类学上的位置，这个过程叫细菌鉴定。细菌生物学性状包括菌落形态、菌体形态、染色性质、生化反应以及血清学反应特性和特异性噬菌体等。

细菌的分类是根据其营养方式及各种生物学特性亲缘关系，将细菌划分为不同的门、纲、目、科、属、种，其基本分类单位是种。

（1）菌落形态：菌落的特征是识别细菌的重要依据，观察菌落特征时应注意：边缘是整齐的、还是锯齿的，表面是光滑的、还是粗糙的，中间是突起的、还是凹陷的，是透明的、还是半透明或不透明的。

如乙型溶血性链球菌，在血琼脂平皿上，菌落灰白色，圆形，中央稍凸起，透明或半透明，表面光滑，菌落周围可见透明的溶血环。而绿脓杆菌，在选择性培养基（NAC）上菌落扁平，边缘不整齐，大小不一，表面湿润、有光泽，菌落周围有蓝绿色或褐色色素扩散，但也有不产生色素的菌株。这些菌落特征在细菌的鉴定中均有一定意义。

（2）细菌的生化反应特性：各种细菌具有各自独特的酶系统，因而在代谢过程中所产生的分解与合成代谢产物也不同。这些代谢产物又各具不同的生化特点。根据此特点，利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生化反应试验。生化反应试验方法很多，主要有以下几种：

①糖（醇）类发酵试验：是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠杆菌则可发酵葡萄糖和乳糖；即使两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠杆菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

②葡萄糖代谢类型鉴别试验：可用于葡萄球菌与微球菌的鉴别。

③β-半乳糖苷酶试验（ONPG）：分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，如埃希氏菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属和沙雷氏菌属等。而不发酵乳糖的细菌如沙门菌、变形杆菌和肠杆菌科中其他不发酵乳糖的细菌ONPG试验均为阴性。

④其他生化试验：如淀粉水解试验、七叶苷水解试验、甲基红试验及VP试验等。

（3）革兰氏染色法：染色除能观察细菌形态外，还可根据其染色反应，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性菌两大类。如沙门菌属、志贺菌属、巴斯德杆菌及耶尔森菌等均为革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌有肺炎链球菌、单核细胞增生性李斯特杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠棒状杆菌等。

（4）血清学鉴定：除生化鉴定外，必要时可进行血清学鉴定。如沙门菌属、志贺菌属、绿脓杆菌、耶尔森菌等均可做血清学分型试验。

根据送检动物的不同级别，对所需检查的病原菌进行逐项排查，最后得出检测结论。