免疫复合物的几种测定方法
互联网
1、聚乙二醇沉淀法测定免疫复合物
简要原理
聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一种无电荷的线性分子结构的多糖，为乙二醇的聚合物，有较强的脱水作用。其沉淀循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC）的原理不太清楚，可能与CIC的分子量增大和构型的改变有关。利用3%-4%的PEG可以选择性的将大分子CIC沉淀下来，将此沉淀定量溶解，用分光光度计可实现对CIC的检测。
试剂与仪器
（1）M硼酸缓冲液 秤取硼砂0.04g、硼酸0.51g，溶解于100ml蒸馏水中，调节PH至8.6；
（2）7%PEG溶液和3.5% PEG溶液 用硼酸缓冲液配制，PEG分子量为6000；
（3）0.1M NaOH溶液；
（4）分光光度计等。
实验步骤
（1）取0.3ml待检血清,加入等量7%PEG溶液,充分混合,置4℃作用2h,3000rpm离心20min,弃去上清；
（2）用3.5% PEG溶液以同样转速和时间离心洗涤两次，得免疫复合物；
（3）将沉淀物溶于3ml 0.1M NaOH溶液中；
（4）用分光光度计测A280nm值；
（5）同法检测100例以上健康人的血清A280nm，确定正常值范围（X+2SD），以大于正常值时判为阳性。
注意事项
（1）如需定量测定可用不同浓度的热聚合人IgG（HAHG）作为参考标准品，绘制标准曲线，推算血清中CIC的浓度；
（2）血清中γ球蛋白增高或脂肪含量过高可导致检测的假阳性；
（3）待检血清一定要保持新鲜，放4℃冰箱不得超过3天，如-20℃保存，时间可延长；
（4）本试验受温度影响较大，包括离心、洗涤时的温度，室温每升高1℃，沉淀物的A280nm值大约下降0.02；
（5）低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹采血；
（6）本试验采用3.5%PEG溶液，若用4%的PEG溶液可沉淀较小的CIC，如为2%的PEG溶液，则只能沉淀分子量较大的CIC，如果PEG的浓度超过5%，可使IgM等其他血清蛋白同时沉淀，导致假阳性结果。
参考文献
（1）陶义训.1997.免疫学和免疫学检验.北京：人民卫生出版社，210-217；
（2）杨廷彬，尹学念. 1994. 实用免疫学. 长春：长春出版社，546-547。
2、C1q固相法测定免疫复合物
基本原理 将待检血清加入包被有C1q的微量反应板中，待检血清中免疫复合物和C1q结合，再与酶标记抗人IgG反应，通过底物颜色的深浅判断免疫复合物的存在及含量。
试剂与仪器 有成套试剂盒出售。
实验步骤
按试剂盒说明书进行，主要步骤如下：
（1）将待检血清和参考血清（HAHG）分别加入0.2mol/L EDTA溶液中，37℃30min，使体内已和免疫复合物结合的C1q被灭活除去；
（2）每孔加100ul上述灭活的待检血清或参考血清，37℃2h，TBS液 洗三遍；
（3）每孔加1：2000 HRP-抗人IgG 100ul，室温作用1h，TBS液 洗三遍；
（4）每孔加底物100ul，放置暗处10-30min，直至显色；
（5）每孔加50ul 2mol/L H2（SO4）2 终止反应，测A492nm值；
（6）以参考血清HAHG作标准曲线，求出待检血清中免疫复合物的含量。
注意事项
（1）采用C1q固相法测定免疫复合物，由于包被用的C1q非常不稳定，所以测定的结果稳定性较差；
（2）SLE患者血清中抗C1q抗体能产生假阳性；
（3）尽可能采用新鲜血清标本，或-20℃保存，避免反复冻融。
参考文献
（1）陶义训. 1997.免疫学和免疫学检验.北京：人民卫生出版社，211－219；
（2）杨廷彬，尹学念.1994.实用免疫学.长春：长春出版社，548－552。
3、固相抗C3 ELISA法测定免疫复合物
简要原理 免疫复合物在激活固定补体的过程中会产生灭活的C3b（iC3b），而结合在免疫复合物上的i C3b可以与抗C3抗体结合。利用酶标记的抗免疫球蛋白抗体可以检测免疫复合物的含量。
试剂与仪器 有成套试剂盒出售。
实验步骤
按说明书进行，主要步骤如下：
（1）用含0.01M EDTA的pH7.5的PBS稀释待检血清；
（2）每孔加入100ul的稀释待检血清，设置三个复孔；
（3）用胶带覆盖酶标板，37℃温育30min，然后4℃放置1h，用BBS–吐温洗涤三次；
（4）每孔加入200 ul HRP-抗人IgG；
（5）用胶带覆盖酶标板，37℃温育30min，然后4℃放置30min；
（6）用BBS–吐温洗涤三次。用蒸馏水冲洗两次；
（7）每孔加入200ul底物液，放置暗处10-30min，直至显色；
（8）每孔加入50ul 4M H2（SO4）2终止反应，用酶标仪测A490nm值。
注意事项
（1）试验时需要以正常人血清设置阴性对照；
（2）本试验方法敏感，可达5-10ug/ml；
（3）本试验方法可以检测能够固定补体的免疫复合物（主要是IgM与抗原组成的免疫复合物或IgG1-3与抗原组成的免疫复合物）；
（4）不适当的操作可以造成IgG的非特异性凝集，如血清反复冻融、加热灭活，或不恰当的贮存，均可造成假阳性。
参考文献
Pereira，A.B.，Theofilopoulos，A.N. and Dixon，F.J.1980. Detection and partial characterization of circulating immune complexes with solid-phase anti-C3.J.Immunol.125：763-770.
