免疫复合物的几种测定方法

1、聚乙二醇沉淀法测定免疫复合物

简要原理

聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一种无电荷的线性分子结构的多糖，为乙二醇的聚合物，有较强的脱水作用。其沉淀循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC）的原理不太清楚，可能与CIC的分子量增大和构型的改变有关。利用3%-4%的PEG可以选择性的将大分子CIC沉淀下来，将此沉淀定量溶解，用分光光度计可实现对CIC的检测。

试剂与仪器

（1）M硼酸缓冲液 秤取硼砂0.04g、硼酸0.51g，溶解于100ml蒸馏水中，调节PH至8.6；

（2）7%PEG溶液和3.5% PEG溶液 用硼酸缓冲液配制，PEG分子量为6000；

（3）0.1M NaOH溶液；

（4）分光光度计等。

实验步骤

（1）取0.3ml待检血清,加入等量7%PEG溶液,充分混合,置4℃作用2h,3000rpm离心20min,弃去上清；

（2）用3.5% PEG溶液以同样转速和时间离心洗涤两次，得免疫复合物；

（3）将沉淀物溶于3ml 0.1M NaOH溶液中；

（4）用分光光度计测A280nm值；

（5）同法检测100例以上健康人的血清A280nm，确定正常值范围（X+2SD），以大于正常值时判为阳性。

注意事项

（1）如需定量测定可用不同浓度的热聚合人IgG（HAHG）作为参考标准品，绘制标准曲线，推算血清中CIC的浓度；

（2）血清中γ球蛋白增高或脂肪含量过高可导致检测的假阳性；

（3）待检血清一定要保持新鲜，放4℃冰箱不得超过3天，如-20℃保存，时间可延长；

（4）本试验受温度影响较大，包括离心、洗涤时的温度，室温每升高1℃，沉淀物的A280nm值大约下降0.02；

（5）低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹采血；

（6）本试验采用3.5%PEG溶液，若用4%的PEG溶液可沉淀较小的CIC，如为2%的PEG溶液，则只能沉淀分子量较大的CIC，如果PEG的浓度超过5%，可使IgM等其他血清蛋白同时沉淀，导致假阳性结果。

参考文献

（1）陶义训.1997.免疫学和免疫学检验.北京：人民卫生出版社，210-217；

（2）杨廷彬，尹学念. 1994. 实用免疫学. 长春：长春出版社，546-547。