常用培养基配方（二）

1、苯丙氨酸培养基

成分：
　　酵母浸膏 3g
　　DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g） 2g
　　磷酸氢二钠 1g
　　氯化钠 5g
　　琼脂 12g
　　蒸馏水 1000ml

制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。

试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h.滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

2、氨基酸脱羧酶试验培养基

成分：
　　蛋白胨 5g
　　酵母浸膏 3g
　　葡萄糖 1g
　　蒸馏水 1000ml
　　1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1ml
　　L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100ml
　　pH6.8

制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100ml，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1%加入，再行校正pH至6.8，对照培养基不加氨基酸，分装于灭菌的小试管内，每管0.5ml，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色，对照管应为黄色.。

3、蛋白胨水（靛基质试验用）

成分：
　　蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g
　　氯化钠 5g
　　蒸馏水 1000ml
　　pH7.4

制法：按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。
　　靛基质试剂
　　柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。
　　欧-波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸20ml。

试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d，加入柯凡克试剂约0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层成深红色；或加入欧-波试剂约0.5ml，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

14、硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）

成分：
　　牛肉膏 3g
　　酵母浸膏 3g
　　蛋白胨 10g
　　硫酸亚铁 0.2g
　　硫代硫酸钠 0.3g
　　氯化钠 5g
　　琼脂 12g
　　蒸馏水 1000ml
　　pH7.4

制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。

试验方法：挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±1℃培养1～2d，观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色。

注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。

15、尿素琼脂

成分：
　　蛋白胨 1g
　　氯化钠 5g
　　葡萄糖 1g
　　磷酸二氢钾 2g
　　0.4%酚红溶液 3ml
　　琼脂 20g
　　蒸馏水 1000ml
　　20%尿素溶液 100ml
　　pH7.2±0.1

制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，121℃高压灭菌15min，冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1，分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果，尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

16、氰化钾（KCN）培养基

成分：
　　蛋白胨 10g
　　氯化钠 5g
　　磷酸二氢钾 0.225g
　　磷酸氢二钠 5.64g
　　蒸馏水 1000ml
　　0.5%氰化钾溶液 20ml
　　pH7.6

制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min，放在冰箱内使其充分冷却，每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0ml（最后浓度为1：10000），分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4ml，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月，同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

17、氧化酶试验

试剂：
　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制，干冰箱内避光保存.
　　1%α-萘酚-乙醇溶液。

试验方法：取白色洁净滤纸沾取菌落，加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色，阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。

18、 硝酸盐培养基

成分：
　　硝酸钾 0.2g
　　蛋白 5g
　　蒸馏水 1000ml
　　pH7.4

制法：溶解，校正pH，分装试管，每管约5ml，121℃高压灭菌15min。
　　硝酸盐还原试剂：
　　甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
　　乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。

试验方法：接种后在36±1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果：硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。

注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。

19、 细胞色素氧化酶试验

试剂：
　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.
　　1%α-萘酚-乙醇溶液。

试验方法：取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物，如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。

结果：于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。

20、过氧化氢酶试验

试剂：
　　3%过氧化氢溶液：临用时配制。

试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2ml，观察结果。

结果：于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。