我的自然电泳的一些配方

电泳试剂

⑴样品缓冲液（４×）：1mol/L Tris-HCl, 20%甘油，0.001%溴酚蓝(w/v), pH 6.8。

⑵30％丙烯酰胺单体贮存液：29.2g丙烯酰胺(acrylamide), 0.8g N,N’-甲叉双丙烯酰胺(N,N’-methylenebisacrylamide), 加超纯水充分搅拌至完全溶解定容至100ml, 漏斗过滤后置于棕色瓶内4℃避光保存。

⑶分离胶缓冲液（4×）：1.5mol/L Tris-HCl, pH9.10, 4℃保存。

⑷浓缩胶缓冲液（8×）：1mol/L Tris-HCl, pH6.8, 4℃保存。

⑸凝胶聚合引发剂——10%过硫酸铵（Ammonium Persulfate, APS）溶液：0.1g过硫酸铵加超纯水溶解，定容至1ml。

⑹凝胶聚合增速剂——N，N，N’，N—四甲基乙二胺（N，N，N’，N—tetramethylethylethylenediamine, TEMED）

⑺正极缓冲液（４×）： 205.6g Tris，加超纯水溶解，pH9.0, 定容至1000ml。

⑻负极缓冲液（10×）： 49.2gTris，24.7g硼酸, 加超纯水溶解，pH 8.6, 定容至1000ml。

⑼考马斯亮蓝染液：0.25%考马斯亮蓝R—250，50%甲醇，10%冰醋酸配制而成。

⑽考马斯亮蓝凝胶脱色液：30%甲醇，10%冰醋酸配制而成。

⑾蛋白质标准分子质量—Marker：Ovalbumin 45KD, Bovine serum albumin monomer 66KD, Urease trimer 272KD, Urease hexamer 545KD，Cat.No.MW-ND-500，为Sigma公司产品。

其他试剂

⑵10%琼脂糖(agarose)：0.1g琼脂糖, 加超纯水溶解, 定容至10ml。

⑶溴酚蓝指示剂：50%甘油, 0.4%溴酚蓝, 加超纯水配制而成。

配制分离胶和浓缩胶

10%的分离胶由30%丙烯酰胺、分离胶缓冲液、TEMED和10%APS加超纯水配制而成。将电泳模具垂直放置，两边和底用10%琼脂糖密封，把配制好的分离胶从顶部灌入模具。迅速小心地在分离胶表面加一层超纯水，封住胶面，以促使聚合并使凝胶表面平直。

凝胶在37℃恒温箱中放置1小时后，可以观察到出现水、胶分离的界面表示凝胶已聚合。吸去水，用浓缩胶缓冲液淋洗凝胶。4%浓缩胶由30%丙烯酰胺、浓缩胶缓冲液、TEMED和10%APS加超纯水配制而成。将现配好的浓缩胶灌入模具，并插入与模具大小相同，与凝胶厚度相当的梳子。然后让模具再静置在37℃恒温箱中，聚合1小时。