【原创】碱性非变性电泳配方

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碱性非变性电泳　工作液配制

40%胶贮液(Acr:Bis=29：1）  
4×分离胶Buf(1.5 M Tris-HCl，pH 8.8)：18.2 g Trisbase 溶于80ml 水，用浓HCl调pH 8.8，加水定容到100ml，4℃ 贮存
4×堆积胶Buf(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8)：6 g Trisbase 溶于80ml 水，用浓HCl调pH 6.8，加水定容到100ml，4℃ 贮存
10×电泳Buf（pH8.8 Tris-Gly）:  30.3 g Trisbase， 144 g 甘氨酸，加水定容到1L，4℃ 贮存
2×溴酚蓝上样Buf:1.25ml pH6.8, 0.5M Tris-Cl，3.0ml甘油，0.2ml 0.5% 溴酚蓝，5.5ml dH2O； -20℃贮存
10％APS  
0.25％考马斯亮蓝染色液:Coomassie blue R-250 2.5g，甲醇450ml，HAc 100ml, dH2O 450ml
考马斯亮蓝脱色液:  100ml甲醇，100冰醋酸，800ml dH2O

电泳胶的配制及电泳条件（上槽电极为负，下槽电极为正）
碱性非变性胶   17%分离胶(10 ml)   4%堆积胶(5 ml)
40%胶贮液(40%T,3.3%C）   4.25ml   0.5ml
4×分离胶Buf(1.5 M Tris-HCl，pH 8.8)  2.5ml   /
4×堆积胶Buf(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8)  /   1.25ml
水   3.2ml   /
10％APS   35 μl
TEMED   15 μl
10×电泳Buf（pH8.8 Tris-Gly）:100ml稀释到1L
电泳条件  :100V恒压约20min，指示剂进入浓缩胶；改换160V恒压，当指示剂移动到胶板底部时，停止电泳，整个过程约80min。
染色和脱色:取出胶板于0.25％考马斯亮蓝染色液中染色约30min，倾出染色液，加入考马斯亮蓝脱色液，缓慢摇动，注意更换脱色液，直至胶板干净清晰背景。